植物のプログラム細胞死の誘導に関わる遺伝子を用いた分子育種技術の確立

利用参与诱导植物程序性细胞死亡的基因建立分子育种技术

• 批准号: 18880009
• 负责人: 山田 哲也
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18880009/
• 关键词: アサガオ; 花弁老化; プログラム細胞死; 老化関連遺伝子; RNAi

本年度の研究成果は以下の通りである.1,アサガオやキンギョソウの老化花弁でプログラム細胞死(PCD)の特徴であるDNAや核の断片化が生じていることを確認し,花弁の老化にPCDが関与することを明らかにした.この結果,これらの植物の花弁老化時に発現量が変化する遺伝子(花弁老化関連遺伝子)を単離・解析することで,植物のPCDに関与する遺伝子の同定が可能であることが示唆された.2,cDNAサブトラクション法とディファレンシャルスクリーニング法を用いて単離したアサガオの20種類の花弁老化関連遺伝子について,Real-time RT-PCR法により発現解析を行ったところ,多くの遺伝子が老化症状の現れる直前の花弁で特異的に発現量が増加することを明らかにした.この結果,これらの遺伝子が花弁老化(PCD)の誘導にポジティブに関与している可能性が極めて高いことが示唆された.3,アサガオより単離した20種類の花弁老化関連遺伝子について,それぞれのcDNA断片をGATEWAY法により市販のベクター(pH7GWIWG2(II):選抜マーカーとしてハイグロマイシン耐性遺伝子を含む)に導入し,RNAiを誘導するためのコンストラクトを構築した.4,アグロバクテリウム法により4種類のRNAiコンストラクト(LR1,LR3,LR4,LR5)をアサガオの不定胚形成カルスに導入したところ,LR1,LR3およびLR4でハイグロマイシン耐性を示す再分化個体を得た.再分化個体は順化後直ちに開花し,LR1とLR3で自殖種子を得た.今後は,アサガオへのRNAiコンストラクトの導入を進め,得られた再分化個体の自殖後代について,導入遺伝子の確認や発現解析,表現型の調査などを行い,花弁老化関連遺伝子の発現抑制が植物の諸形質に及ぼす影響を明らかにする予定である.

は の research results this year following の tong り で あ る. 1, ア サ ガ オ や キ ン ギ ョ ソ ウ の aging flower chemical で プ ロ グ ラ ム cell death (PCD) の 徴 で あ る や nuclear の DNA fragment the が raw じ て い る こ と を confirm し, flower chemical aging の に PCD が masato and す る こ と を Ming ら か に し た. こ の results, こ れ ら の の chemical age に flowers 発 quantity が now - the す る heritage 伝 child (chemical aging masato even heritage 伝) を 単 from · analytic す る こ と で, plant の PCD に masato and す る heritage 伝 の son be が may で あ る こ と が in stopping さ れ た. 2, cDNA サ ブ ト ラ ク シ ョ ン method と デ ィ フ ァ レ ン シ ャ ル ス ク リ ー ニ ン を グ method with い て 単 from し た ア サ ガ オ の 20 kinds の chemical old flower To transform the related legacy 伝 sub-son に に て て,Real-time Rt-pcr method に よ り 発 now line analytical を っ た と こ ろ, more く の posthumous son 伝 が aging symptoms の is れ る ahead の flower chemical で specific に 発 now quantity が raised す る こ と を Ming ら か に し た. こ の results, こ れ ら の heritage 伝 が flower son chemical aging (PCD) induced に の ポ ジ テ ィ ブ に masato and し て い る が extremely likely め て high い こ と が in stopping さ れ た . 3, ア サ ガ オ よ り 単 from し た 20 kinds の flower chemical aging masato even heritage 伝 son に つ い て, そ れ ぞ れ の cDNA fragment を GATEWAY method に よ り city vendor の ベ ク タ ー (pH7GWIWG2 (II) : the chosen sorting マ ー カ ー と し て ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を む) に import し, RNAi induced す を る た め の コ ン ス ト ラ ク ト を build し た. 4, ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム method に よ り 4 kinds の RNAi コ ン ス ト ラ ク ト (LR1 LR3, LR4, LR5) を ア サ ガ オ の adventitious embryo formation カ ル ス に import し た と こ ろ, LR1, LR3 お よ び LR4 で ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience を shown す redifferentiation individual を た. After re-differentiation, the individual <s:1> is cis-transformed and then directly ちに flowers,LR1とLR3で self-colonizing seeds を to た. The next は ア サ ガ オ へ の RNAi コ ン ス ト ラ ク ト の import を め, too ら れ た redifferentiation individual の offspring since colonization に つ い て, import legacy 伝 son の confirm や 発 parsing, phenotype の survey な ど を い, flower chemical aging masato even heritage 伝 son の 発 の inhibit が plants now the character に and ぼ す influence を Ming ら か に す る designated で あ る.