刺激型抗TLR抗体による新しい癌の治療法の理論構築と創薬開発への応用

使用受刺激的抗 TLR 抗体构建新的癌症治疗方法及其在药物发现和开发中的应用

• 批准号: 18890140
• 负责人: 塚本 宏樹
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: Saga University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890140/
• 关键词: 癌; 免疫学; 薬理学; シグナル伝達; 抗体

Pathogen-associated molecular patterns(PAMPs)がToll-like receptor(TLR)により認識されると、生体は免疫応答を惹起する。このPAMPsによる生体応答調節機能を応用した癌の免疫賦活療法が試みられ、PAMPsアナログの創薬開発が進められている。しかし、PAMPsにはエンドトキシンショックのような負の側面も存在するため、有効な治療薬の開発には至っていない。PAMPsがTLR以外の分子によっても認識されることが一つの要因であると考えられる。さらに、PAMPsは生体内で速やかにクリアランスされるため、持続的効果の点で、PAMPsアナログにはデメリットがある。本研究は、刺激型抗TLRモノクローナル抗体を作製・応用し、新しい癌の免疫賦活療法の理論構築を目的とする。既に樹立した6種類のTLR4モノクローナル抗体のエピトープとその機能について解析した。各抗体の認識様式は、TLR4とその会合分子MD-2の発現細胞とTLR4単独発現細胞のフローサイトメトリー、免疫沈降法で解析した。6つ抗体のうち、4つはTLR4/MD-2複合体を認識し、2つはTLR4を単独で認識することを明らかにした。また、各抗体間のエピトープの違いを、フローサイトメトリーによる競合試験で明らかにした。各抗体の機能について、アゴニストであるlipopolysaccharideとの比較検討を行った。その結果、5つはlipopolysaccharideと同様の生物活性を示し、マクロファージからのサイトカイン産生を誘導した。更に、刺激型TLR4抗体に続き、細胞膜表面上に発現するTLR2、TLR1、TLR6を認識するモノクローナル抗体の作製も進めた。各マウスTLR遺伝子をクローニングし、C末端にFLAGタグを付加する発現ベクターをそれぞれ構築した。本ベクターをマウス、ヒト、ラット培養細胞株に遺伝子導入し、安定発現細胞を樹立することに成功した。これら細胞を免疫原とハイブリドーマのスクリーニングに応用し、それぞれのTLRを認識するモノクローナル抗体を作製中である。

Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and Toll-like receptors (TLR) are recognized and induced by immune responses in the body.このPAMPs are used to regulate the body's response to cancer and are used as immune revitalizing therapies for cancer.しかし、PAMPsにはエンドトキシンショックのようなnegativeのThere is a side effect and an effective treatment method is used to treat the disease. PAMPs are molecules other than TLRs, and the key to understanding them is the reason why they are known.さらに、PAMPs in vivo , The effect of holding the 続 is the point of the PAMPs. The purpose of this study is to produce and use stimulating anti-TLR anti-TLR antibodies and to construct a new theory of immune revitalization therapy for cancer. We have established 6 types of TLR4 antibodies and analyzed their functions. The recognition method of each antibody, TLR4 and the convergence molecule MD-2, the detection of TLR4 monoclonal cells, and the analysis of immunoprecipitation method. 6つantibodyのうち, 4つはTLR4/MD-2 complex をKnowledgeし, 2つはTLR4を単单でKnowledgeすることを明らかにした.また, のエピトープのviolation いを, フローサイトメトリーによる Competition test験で明らかにした between each antibody. The functions of each antibody are as follows: comparison of the functions of each antibody and the performance of each antibody.そのRESULTS, 5つはlipopolysaccharideと同様のbioticactivityをshowし,マクロファージからのサイトカインproducesをinducingした. More information, stimulatory TLR4 antibodies, recognition of TLR2, TLR1, and TLR6 on the cell membrane surface, and production of antibodies to TLR4. Each マウスTLR legacy 伝子をクローニングし, C-terminal にFLAG タグをuka する発开ベクターをそれぞれ CONSTRUCTION した. This ベククターをマウス, ヒト, ラット cultured cell line has been successfully introduced and the stable and stable cells have been successfully established.これら cell をimmunogen とハイブリドーマのスクリーニングに応し,それぞれのTLRをKnowledge of するモノクローナルantibodies である.

项目成果

Molecular characterisation of a germ cell-specific antigen, TEX101,from mouse testis.

来自小鼠睾丸的生殖细胞特异性抗原 TEX101 的分子特征。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Zygote (in press.)
• 作者: Jin H.;et al.
• 通讯作者: et al.

Genetic variation in ABCB1 influences paclitaxel pharmacokinetics in Japanese patients with ovarian cancer

• DOI: 10.1111/j.1525-1438.2006.00593.x
• 发表时间: 2006-05-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF GYNECOLOGICAL CANCER
• 影响因子: 4.8
• 作者: Yamaguchi, H.;Hishinuma, T.;Goto, J.
• 通讯作者: Goto, J.

Testicular proteins associated with the germ celトmarker, TEX101 : Involvement of cellubrevin in TEX101-trafficking to the cell surface during spermatogenesis.

与生殖细胞标记 TEX101 相关的睾丸蛋白：在精子发生过程中，cellubrevin 参与 TEX101 运输至细胞表面。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun 345
• 作者: 吉住 朋晴;武冨 紹信;副島 雄二;内山 秀昭;池上 徹;柿沼 由彦;池上 徹;藤瀬 修;本山 一夫;Tsukamoto H;Tsukamoto H
• 通讯作者: Tsukamoto H

Genomic organization and structure of the 5'-flanking region of the TEX 101 gene: alternative promoter usage and splicing generate transcript variants with distinct 5'-untranslated region

TEX 101 基因 5-侧翼区域的基因组组织和结构：替代启动子使用和剪接生成具有不同 5-非翻译区域的转录本变体

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol Reprod Dev 74・2
• 作者: T.Inamoto;T.Yamochi;K.Ohnuma;S;Iwata;S;Kina;S;Inamoto;M.Tachibana;Y.Katsuoka;Nam H.Dang;C;Morimoto;Hiroki Tsukamoto
• 通讯作者: Hiroki Tsukamoto