アワノメイガ類における性フェロモン生合成特異的な脂肪酸還元酵素の解析

玉米螟性信息素生物合成特异性脂肪酸还原酶分析

• 批准号: 06F06202
• 负责人: 田付 貞洋
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06202/
• 关键词: アワノメイガ; 性フェロモン; 生合成; 脂肪酸還元酵素; pgFAR; アラノメイガ

アズキノメイガOstrinia scapulalisのフェロモン腺特異的脂肪酸還元酵素をコードする遺伝子としてFAR-XIIIをクローニングした。FAR-XIIIは462アミノ酸残基からなる質量52,585Daのタンパク質をコードしていた。FAR-XIIIは他の還元酵素と同様に、N末端側によく保存されたNAD(P)H結合モチーフを有し、カイコBonbyx moriのFARとは36%のホモロジーを示した。この遺伝子がメスのフェロモン腺(腹部末端第8-9節間膜)で特異的に発現していることをin situハイブリダイゼーションにより確認した。FAR-XIIIの機能解析のため、sf9細胞のリポフェクションによる形質転換系を作成した。まず、プラスミドベクターpIZT/V4-HisのOpIE2プロモーターの下流にFAR-XIIIの462アミノ酸残基をコードするORFを組み込んだpIZT-/V5-His-FAR-XlIIを作成した。ついで、pIZT-/V5-His-FAR-XIIIでSf9細胞を形質転換してFAR-XIIIを発現させ、脂肪酸還元活性を調査したところ、E11-14:OH,Z11-14:OH,E12-14,Z12-14,Z-(9)-hexadecanol-1-ol,E-(11)-hexadecanol-1-olのアルコールが検出された。これに対し、コントロールベクターのpIZT-/V5-Hisで形質転換したsf9細胞からは上記のいずれのアルコールも検出されなかった。これによりFAR-XIIIが還元活性をもつことが明確に証明された。本成果は、フェロモン腺特異的な還元酵素としてはカイコにつぐ2番目の発見である。

FAR III is a fatty acid-reducing enzyme specific to Ostrinia scapulalis. FAR-XIII has 462 amino acid residues and 52,585 Da amino acid residues. FAR-XIII has the same enzyme as other enzymes, and the N-terminal side has the same enzyme as NAD(P)H. FAR-XIII has the same enzyme as NAD(P)H. This is the first time that a person's brain has been identified. The functional analysis of FAR-XIII and the formation of a morphologic transition system for SF9 cells The ORF of FAR-XIII at 462 amino acid residue was formed in the downstream of pIZT/V4-His OpIE2. pIZT-/V5-His-FAR-XIII and Sf9 cells were transformed into FAR-XIII cells, fatty acid reduction activity was investigated, E11- 14:OH,Z11 - 14: OH,E12 - 14,Z12 - 14,Z-(9)-hexadecanol-1-ol,E-(11)-hexadecanol-1-ol were detected. The pIZT-/V5-His cell line was isolated from the cell line. This is a clear proof that FAR-XIII is active. The results showed that the enzyme activity of the enzyme was higher than that of the control group.