Epstein-Barrウイルスの複製に伴う宿主細胞応答の解析

与 Epstein-Barr 病毒复制相关的宿主细胞反应分析

• 批准号: 06J01906
• 负责人: 工藤 あゆみ
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J01906/
• 关键词: Epstein-Barr Virus; 溶解感染; 宿主DNA複製; RPA2; DNA損傷; DNA修復; 相同組み換え; タンパク質修飾(リン酸化); 蛋白質修飾(リン酸化)

RPAは3つのサブユニット(RPA1,RPA2,RPA3)から成る蛋白質複合体で、一本鎖DNAに結合する。DNA複製において各段階でRPAは重要な働きを持つ。さらにDNA組み換え修復、遺伝子発現等のDNAを器質とするさまざまな反応に関与する多機能因子であることが知られている。RPA複合体の一つRPA2サブユニットは特に細胞周期信仰やDNA損傷存在かにおいてリン酸化修飾を受けることが知られ、細胞周期制御、DNA損傷応答との関連が報告されている。EBVウイルス複製感染を誘導した細胞では経時的にRPA2のリン酸化修飾が増加し、またRPA2自身およびリン酸化修飾RPA2のDNA結合画分への移行が観察された。さらにリン酸化RPA2はEBウイルス複製領域中に共局在することが免疫染色による観察により明らかとなった。またこのときRPA2と同様にDNA組み換え修復に昨日する因子(Rad51,Rad52,Mre11,Nbs1)もEBウイルス複製領域中での共局在が観察された。免疫沈降実験により、リン酸化RPA2、Mre11,Rad52はEBウイルスDNA複製に関与するウイルス因子BMRF1と共沈してくることがわかり、さらにDNA組み換え修飾に関与する因子群はEBウイルスゲノムを免疫沈降により共沈させることが明らかとなった。またこうしたDNA組み換え修復に関連するタンパク質がEBウイルス複製領域内に観察されるたことは、そこにDNA損傷(DNA二重鎖切断部位)が存在することが強く示唆された。そこでTUNELアッセイを行いDNA二重鎖切断部位の有無を検証したところ、新規DNA合成領域に確かにDNA損傷部位を認めた。またsiRNAを用いてRad51とRPAをdeletionさせるとEBVゲノム合成能に著しい低下がみられた。以上のことから、EBウイルスDNA複製進行中、宿主DNA祖み換え修復関連タンパク質はウイルス複製装置と共に挙動し、そこでウイルスゲノム合成のいずれかのステップに関連してることが示唆された。

RPA 3 (RPA1,RPA2,RPA3) is a protein complex that binds to DNA in a single lock. DNA replication at all stages of RPA is important. The DNA genome, repair, gene development, etc. are related to multifunctional factors. The RPA complex is a complex of RPA2 and DNA damage. The cell cycle beliefs, DNA damage, and acidification modifications are all related to the cell cycle control and DNA damage response. EBV replication was induced in the cells, and the DNA binding profile of RPA2 was observed to increase during incubation, and to increase during incubation. In addition, RPA2 can also be used to detect the presence of the virus in the immune system. The same DNA sequence as RPA2 was detected in the replication domain of EB 51,Rad52,Mre11,Nbs1. Immunoprecipitation, DNA sequencing, RPA2, Mre11,Rad52, EB DNA replication, factor BMRF1, co-precipitation, DNA genome modification, factor group EB DNA replication, co-precipitation, and so on. DNA damage (DNA double lock cut site) is detected in the DNA replication domain and is strongly indicated. DNA double lock cleavage site identification and identification in DNA synthesis Rad51 is deleted and EBV is synthesized. The DNA replication of the host DNA is in progress, and the host DNA precursor repair is related to the DNA replication device.

项目成果

Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-MCM6-MCM7 complex during Epstein-Barr virus productive replication

• DOI: 10.1128/jvi.00678-06
• 发表时间: 2006-10-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Kudoh, Ayumi;Daikoku, Tohru;Tsurumi, Tatsuya
• 通讯作者: Tsurumi, Tatsuya

ニューサイエンス社

新科学公司

• 发表时间: 2014
• 作者: 橋本亮太;山森英長;安田由華;大井一高;藤本美智子;梅田知美;武田雅俊
• 通讯作者: 武田雅俊

Recruitment of Homologous Recombination Factors to EBV Replication Compartments

将同源重组因子招募到 EBV 复制区室

• 发表时间: 2007
• 作者: 越山圭美;田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;伊藤圭祐;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ;工藤 あゆみ
• 通讯作者: 工藤 あゆみ

Epstein-Barrウイルス産生感染に伴うRPA2のリン酸化と相同組み換え因子の挙動

EB病毒感染过程中RPA2的磷酸化和同源重组因子的行为

• 发表时间: 2007
• 作者: 越山圭美;田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;伊藤圭祐;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ
• 通讯作者: 工藤 あゆみ

PEN蛋白質核酸酵素 別冊 Vol.52 No.10

PEN蛋白核酸酶分离卷Vol.52 No.10

• 发表时间: 2007
• 作者: 越山圭美;田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;越山圭美・田中晃二;伊藤圭祐;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;相馬直子;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ;Ayumi Kudoh;工藤 あゆみ;工藤 あゆみ;鶴見達也
• 通讯作者: 鶴見達也