权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

プロテオミクス解析を用いたカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス溶解感染機構の解明

利用蛋白质组学分析阐明卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解感染机制

基本信息

批准号：
16H07325
负责人：
阿部温子
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Kyoto Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-08-26 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H07325/
关键词：
KSHV 溶解感染ウイルス創薬発癌

项目摘要

KSHVの溶解感染に関わる因子の多くは未だ同定されておらず、溶解感染機構は未だ解明されていない部分が大きい。そのため、本研究ではKSHVの溶解感染機構を解明するために、溶解感染に重要である因子を同定することを目的としている。2017年3月末までの期間において、KSHVの細胞への感染後からの潜伏感染と溶解感染の各ステージにおいて経時的に発現が変動する因子の解析を行った。その結果、プロテオミクス解析を用いた網羅的探索により、潜伏感染細胞と溶解感染細胞で発現が変化する30個のKSHV由来のウイルスタンパクを同定することに成功した。次にプロテオミクス解析の条件を最適化するために、溶解感染誘導後、経時的に回収したサンプルを用いて、KSHV全てのORFについて定量的PCR法を行い、各mRNAの発現のタイミングを解析した。その結果、KSHVのタンパク発現プロファイルを作成するには溶解感染誘導後48時間および72時間が最適であったため、今後は溶解感染誘導後48時間、72時間のサンプルを用いて解析を行う予定である。また、今回のプロテオミクス解析では30種類のウイルスタンパクが同定されたが、感度を向上させるために細胞質と核を分画して解析を行う予定である。また、プロテオミクス解析により、ウイルス由来因子のみならず、溶解感染誘導後発現パターンが変化する60個以上の宿主性タンパク質を同定することに成功した。発現上昇が顕著だったものに焦点を当て、ウエスタンブロット法を用いて確認を行ったところ、ユビキチン様タンパクFAT10とユビキチン活性化酵素UBE1L2の発現量の顕著な変化が認められた。定量的PCR法を用いてKSHVの溶解感染におけるユビキチン様タンパクのmRNA量の変化を確認したところ、FAT10は他のユビキチン様タンパクに比べて顕著にmRNA量が上昇していることが確認された。

KSHV lytic infection related factors are not identified, lytic infection mechanisms are not identified, some of them are large. The purpose of this study is to clarify the mechanism of lysis of KSHV infection and to determine the important factors of lysis infection. The analysis of the factors affecting the development of latent infection and lysis of infection during the period from the end of March 2017 to the end of March 2017 The results of this study were as follows: (1) The results of this study were as follows: (2) The results of this study were as follows: (3) The results of this study were as follows: Optimization of the conditions for the analysis of mRNA expression, analysis of mRNA expression after induction of lytic infection, analysis of mRNA expression after induction of lytic infection, and quantitative PCR of KSHV ORF. The results showed that KSHV could be detected at 48 and 72 hours after infection induction, respectively. The analysis of 30 types of DNA is based on the analysis of cytoplasm and nucleus. More than 60 host species were successfully identified after infection induction by analyzing the origin factors and dissolving them. The activity of UBE1L2 is detected by the method of detecting and identifying the activity of UBE1L2. Quantitative PCR method was used to confirm the change of mRNA quantity in KSHV lysing infection, and FAT10 was used to confirm the increase of mRNA quantity in KSHV lysing infection.