アントラセン-DNAコンジュゲートの光化学ライゲーションおよび遺伝子解析への応用

蒽-DNA缀合物的光化学连接及其在遗传分析中的应用

• 批准号: 06J08090
• 负责人: 迎 文都子
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J08090/
• 关键词: DNAコンジュゲート; 光二量化反応; 光化学ライゲーション; 遺伝子解析; 質量分析; アントラセン

本研究では、アントラセンの光二量化を利用したDNAの光化学ライゲーションを検討している。これまでにアントラセン-DNAコンジュゲートを合成し、鋳型DNA存在下、光照射によって光二量体が生成することを示した。さらに、アントラセンの置換位置を9位から1位および2位に変えることによって、二量化効率が飛躍的に向上した。また、鋳型DNA中の一塩基変異を反応効率の差として検出することができた。そこで、本年度はシグナル増幅反応へ向けた基礎検討、光可逆的なライゲーションの検討を行った。【シグナル増幅反応へ向けた基礎検討】LCR(ligase chain reaction)のようにライゲーション反応を連鎖的に行い、遺伝情報を増幅することができれば、極微量のサンプルから遺伝子解析が可能である。そこで、大過剰のコンジュゲート存在下において、二本鎖の形成、ライゲーション、二本鎖の解離という温度サイクルを繰り返し、光二量体の増幅を試みた。鋳型DNAとコンジュゲートのモル比を1:50とし、温度サイクルを10サイクル行った。標的DNAがフルマッチである場合は、光二量体の増幅が見られた。しかし、鋳型DNAに一塩基変異が存在すると、光二量体の増幅は見られず、サンプル量が極微量である場合の遺伝子解析へ応用できる可能性を示した。【光可逆的なライゲーションの検討】アクリジンはアントラセンのように360nm付近の光を照射することによって[4+4]光環化反応がおこる。生成した光二量体は窒素原子を含むため、アントラセンの光二量体よりも長波長領域に吸収を持ち、可逆的にライゲーションを行うことができると考えられる。そこで、アクリジン-DNAコンジュゲートを合成した。鋳型DNA存在下、366nmの光照射によって光二量体が生成し、312nmの光照射によって、もとのコンジュゲートに戻ることを示した。

In this study, we discussed the application of DNA photochemistry in the study of DNA photochemistry. This is the first time that DNA has been synthesized in the presence of light. For example, the position of substitution is 9 bits, 1 bit and 2 bits, and the quantization rate is 2 bits. The difference in the rate of DNA amplification between the two genomes is not significant. This year, the company has launched a series of research projects to improve the quality of its products. The LCR(ligase chain reaction) is a chain reaction, and it is possible to analyze the LCR(ligase chain reaction) by increasing the amplitude of the LCR and the amount of particles. In the presence of a large number of molecules, the formation of a binary molecule, the dissociation of a binary molecule, the temperature of a binary molecule, and the amplitude of a binary molecule are tested. Type DNA: 1:50, Temperature: 10:00 The target DNA is amplified in two different ways. The possibility of gene analysis in cases where there is a genetic difference between the two types of DNA and the two types of DNA is shown. [Photoreversible photochemistry] The photochemistry of the [4+4] photochemistry reaction was studied by using 360nm laser irradiation. The generation of two optical quantities includes the absorption of atoms in the long wavelength domain and the reversible absorption of atoms in the long wavelength domain. The combination of DNA and DNA is very important. In the presence of DNA type, light irradiation at 366nm caused the formation of photo-dimer, and light irradiation at 312nm caused the formation of photo-dimer.

项目成果

Colorimetric multiplexed immunoassay using specific aggregation of antigenic peptide-modified luminous nanoparticles.

• DOI: 10.1016/j.aca.2006.04.066
• 发表时间: 2006-09
• 期刊: Analytica chimica acta
• 影响因子: 6.2
• 作者: T. Ihara;Y. Mori;T. Imamura;M. Mukae;Shojiro Tanaka;A. Jyo

Photodimerization of Anthracene Using DNA Template and Its Analytical Application

DNA模板蒽光二聚反应及其分析应用

• 发表时间: 2008
• 作者: M. Mukae;T. Ihara;M. Tabara;P. Arslan;A. Jyo
• 通讯作者: A. Jyo

Anthracene-DNA conjugates as building blocks of designed DNA structures constructed by photochemical reactions

• DOI: 10.1039/b821869b
• 发表时间: 2009-01-01
• 期刊: ORGANIC & BIOMOLECULAR CHEMISTRY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Mukae, Motoko;Ihara, Toshihiro;Jyo, Akinori
• 通讯作者: Jyo, Akinori

The effect of local structural disruption on the yield of photochemical ligation between anthracene-oligonucleotide conjugates

局部结构破坏对蒽-寡核苷酸缀合物之间光化学连接产率的影响

• 发表时间: 2008
• 期刊: Analytical Sciences 24
• 作者: Pelin Arslan

Detection of one base mismatch using Photochemical ligation

使用光化学连接检测一个碱基错配

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleic Acids Symp. Ser. 51
• 作者: Suzuki;N.;Okai;N.;Nonaka;H.;Tsuge;Y.;Inui;M.;Yukawa;H.;神坂 紀久子;神坂 紀久子;神坂 紀久子;神坂 紀久子;Kikuko Kamisaka;神坂 紀久子;神坂 紀久子;神坂 紀久子;神坂 紀久子;M. Mukae;P. Arslan;M. Mukae
• 通讯作者: M. Mukae