新規シグナル伝達抑制分子Spred/SproutyによるMAPキナーゼと骨代謝制御

新型信号转导抑制分子 Spred/Sprouty 对 MAP 激酶和骨代谢的调节

• 批准号: 06J09583
• 负责人: 吉賀 大午
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J09583/
• 关键词: VEGF; チロシンキナーゼ; ERK; 血管; リンパ管; ノックアウトマウス; 負の制御; 脂肪細胞; MAPキナーゼ; Akt; インスリン

Spred/Sproutyファミリー分子はRas/Rafに結合して、チロシンキナーゼによるERK/MAP kinase活性化を抑制する調節因子である。Spredは哺乳類では3種類報告されており、我々はSpred1,Spred2それぞれのノックアウト(KO)マウスを作製し、解析を行ってきた。Spred-2欠損マウスは低成長であり、軟骨細胞に異常が認められた。またSpred-1欠損マウスでは頭蓋骨の形成異常が認められた。破骨細胞分化はSpred-1 KOマウスで亢進しており、KOマウスの低成長と関係を現在調べている。Spred1 KOマウスのsplenicosteoclastでTRAP陽性かつ多核の細胞が多くみられた。またマウス胎児繊維芽再棒(MEF)のprimary cultureを行い、各種増殖因子やサイトカイン刺激し運動性、シグナル伝達を検討中である。さらにSprouty4 KOマウスはback crossを進めながら、表現系を解析中である。また我々は同じくチロシンキナーゼ経路を正に制御する分子SH2-Bにも着目して研究を行っている。SH2-B欠損マウスではインスリンのシグナルが減弱しておりインスリン抵抗性を示した。さらに脂肪細胞分化を調べたところPPARγ転写因子の誘導が抑制されており脂肪細胞分化の顕著な抑制が認められた。この作用はSH2-BがAktのシグナルを増強する分子であることによって説明できる。さらにSH2-Bの樹状細胞(DC)における機能を検討した、RT-PCR, ELISAの結果、KODCではWTと比べてLPS刺激ではIL-6,TNFaが高く、CPG,polyIc刺激では差が認められなかった。DCの表面マーカーCD40,CD86,classIIは差がみられなかった。更にannexinV.PI染色によりDCのapoptosisを検討したが、差はみられなかった。更に細胞内のシグナル伝達についてWestern blotにて確認したが、CPG,polyIcでは顕著な差は認められなかったが、LPS刺激でSH2Bのband sift及びAktのリン酸化の減弱が認められた。その他のシグナルには大きな差はみられなかった。今後SH2-BのTLRシグナルにおける意義を明らかにしたい。

Spred/Sprouty フ ァ ミ リ ー molecular は Ras/Raf に combining し て, チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ に よ る ERK/MAP kinase activation を inhibit す る adjustment factor で あ る. Spred は mammals で は 3 kinds report さ れ て お り, I 々 は Spred1, Spred2 そ れ ぞ れ の ノ ッ ク ア ウ ト (KO) マ ウ ス を set し, analytical を っ て き た. Spred-2 undergrowth ウス ウス low growth であ であ abnormal chondrocyte に が recognition められた. Youdaoplaceholder0 Spred-1 defect, ウスで abnormal formation of skull plecta, が recognition められた. The association between osteoclast differentiation Spred-1 KO ウスで ウスで hyperactivity てお てお てお and KO ウス ウス <s:1> hypogrowth と is を now regulated by べて る る る. Spred1 KO で ウス <s:1> splenicosteoclastでTRAP positive multinucleated <s:1> cells が many くみられた. ま た マ ウ ス tire where 繊 d bud again rods (MEF) の primary culture を い, various rights colonization factor や サ イ ト カ イ ン stimulus し motility, シ グ ナ ル 伝 da を 検 beg in で あ る. Youdaoplaceholder0 Sprouty4 KO ウス ウス ウス back crossを into めながら, representation in を analysis である. ま た I 々 は with じ く チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ 経 route を に suppression す る molecular SH2 - B に も with mesh し を line っ て research て い る. The SH2-B is underdamaged and ウスで, <s:1>, スリ, スリ, シグナ, が, weakened and <s:1>, てお, <s:1>, スリ, スリ. The resistance を indicates that it is た. さ ら に adipocyte differentiation を adjustable べ た と こ ろ PPAR gamma planning write induced が inhibition factor の さ れ て お り adipocyte differentiation の 顕 the な inhibit が recognize め ら れ た. The effect of <s:1> <s:1> on <s:1> SH2-BがAkt <s:1> シグナ する を を to enhance する molecule である とによって とによって explanation: で る る. さ ら に SH2 - B の dendritic cells (DC) に お け る function を beg し 検 た, rt-pcr and ELISA の results, KODC で は WT と than べ て LPS stimulation で は IL - 6, TNFa が high く, CPG, polyIc stimulus で は poor が recognize め ら れ な か っ た. The surface of the DC カ カ カ CD40,CD86,classII がみられな difference がみられな った った. More にannexin v. PI staining によ によ DC <s:1> apoptosisを検 seek <s:1> たが, difference った みられな った った った. More に intracellular の シ グ ナ ル 伝 da に つ い て Western blot に て confirm し た が, CPG, polyIc で は 顕 the poor な は recognize め ら れ な か っ た が, LPS stimulation で SH2B の band sift and び Akt の リ ン acidification の abate が recognize め ら れ た. Youdaoplaceholder0 そ he そ シグナ シグナ に に そ large そ な difference った みられな った った. In the future, the significance of SH2-B <s:1> TLRシグナ における における を is を and ら に に た た に.

项目成果

Adaptor protein SH2-B linking receptor-tyrosine kinase and Akt promotes adipocyte differentiation by regulating peroxisome proliferator-activated receptor gamma messenger ribonucleic acid levels.

• DOI: 10.1210/me.2006-0413
• 发表时间: 2007-05
• 期刊: Molecular endocrinology
• 作者: D. Yoshiga;Naoichi Sato;T. Torisu;H. Mori;Ryoko Yoshida;Seiji Nakamura;G. Takaesu;Takashi Kobayashi;A. Yoshimura

Adaptor protein SH2-B linking receptor-tyrosine kinase and Akt promotes adipocyte differentiation by regulating PPAR{gamma} mRNA levels.

连接受体酪氨酸激酶和 Akt 的接头蛋白 SH2-B 通过调节 PPAR{gamma} mRNA 水平促进脂肪细胞分化。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol Endocrinol. (掲載決定)
• 作者: Yoshida D;Sato N;Torisu T;Mori H;Yoshida R;Yoshimura A;et al.
• 通讯作者: et al.