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グルタミン酸受容体デルタ2の小脳シナプス形成における分子機構の解明

阐明谷氨酸受体δ2在小脑突触形成中的分子机制

基本信息

批准号：
06J10425
负责人：
三上義礼
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,ゼブラフィッシュを用いたin vivoイメージングと遺伝子操作技術を用いて,小脳平行線維-プルキンエ細胞シナプス形成におけるグルタミン酸受容体デルタ2(GluRδ2)の役割(機能ドメインの探索と相互作用分子の同定)を解明することを目的として研究を開始した。本年度は,モルフォリノによるノックダウン効果を検討した。合計4種類の配列の異なるモルフォリノアンチセンスオリゴをそれぞれゼブラフィッシュ胚に導入し,抗GluRδ2抗体による免疫染色により評価を行った。1個体当たり9ngの濃度でモルフォリノアンチセンスオリゴを導入すると受精後5日目までGluRδ2タンパク質の発現を抑制したが,小脳以外の視蓋などの倭小化,奇形・致死を呈する稚魚も多く,非特異的な影響を排除するための条件検討が難航した。また,プルキンエ細胞特異的な遺伝子操作行うために遺伝子を導入する際,-過性に遺伝子発現が観察できる個体数が約20匹に1匹程度と効率が低く、解析可能な個体を十分量得ることが出来なかった。そのため、トランスジェニックラインを作製し、GluRδ2の機能解析を行う等の改善策を開発する必要に迫られた。これらを改良していけば,in vivoにおいてシナプス形成を可視化するシステムを構築でき,シナプス形成の分子メカニズム解明に大きく貢献していぐことができる。一方,本研究を遂行するに当たって習得した電子顕微鏡の手技は,研究室内のマウスを用いたシナプス形成の分子メカニズム解明を目的とした研究にも寄与しており,Uemura, et. al.J Neurosci.27,12096-12108(2007)および,Yasumura, et. al.Neuroscl Lett.433,146-151(2008).に成果として発表された。

This study aims to explore the application of in vivo molecular manipulation techniques to the understanding of the function and identification of interacting molecules of acid receptor GluRδ2 in the formation of small parallel linear molecules. This year, we are looking for a way to improve the quality of our products. Total of 4 kinds of alignment differences were evaluated by immunostaining with anti-GluR δ2 antibody. 1. When the concentration of GluRδ2 was 9ng, the expression of GluRδ2 was inhibited 5 days after fertilization, the size of the optic cover was reduced, the shape of the fish was abnormal, and the condition of non-specific effects was difficult to eliminate. When the cell-specific gene is introduced, the number of individuals detected by the gene is about 20, the efficiency is low, and the number of individuals analyzed is high. It is necessary to develop improvement strategies for the control of GluR δ 2 and the analysis of GluRδ2 functions. This is an improvement in the visualization of the formation of molecules in vivo. The purpose of this study is to study the molecular structure of electron micromirrors in laboratory. al.J Neurosci.27,12096-12108(2007)および,Yasumura, et. al.Neuroscl Lett.433,146-151(2008). The results were presented.