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タバコにおける動原体複合体構成要素の解析および人工染色体の構築

烟草着丝粒复合体成分分析及人工染色体构建

基本信息

批准号：
18770007
负责人：
長岐清孝
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770007/
关键词：
動原体セントロメアキネトコアタバコ染色体人工染色体

项目摘要

1、タバコ動原体タンパク質C(NtCENP-C)の局在解析昨年度に単離したNtCENP-C遺伝子の配列情報をもとに作製したペプチド抗体を用いて、この抗体がNtCENP-Cを認識するかどうかを確かめた。この抗体を用いたタバコ細胞に対する免疫染色で、動原体特異的なシグナルが得られた。この結果から、本研究で同定したNtCENP-Cは、タバコのCENP-Cホモログであることが確認された。また、この抗体は、タバコの動原体のマーカーとして今後の研究に用いることが出来る。2、タバコMIS12タンパク質(NtMIS12)の局在解析CENP-Cと同様に、昨年度に単離したNtMIS12についてもペプチド抗体を作製し、免疫染色によりその局在性を調べたが、明瞭なシグナルは得られなかった。そこで、NtMIS12と緑色蛍光タンパク質(GFP)の融合タンパク質をタバコ培養細胞で発現させ、その局在を調べた。このタンパク質は、動原体特異的なシグナルを示し、本研究で同定したNtMIS12が、タバコのMIS12ホモログであることが確かめられた。3、タバコDNAライブラリーの作製およびタバコ動原体DNAを含むクローンの選抜タバコ細胞の核より長鎖DNAを単離し、制限酵素で部分消化したDNAをクローン化しタバコDNAライブラリーの構築を行った。このライブラリーから昨年度単離したタバコ動原体DNA配列(Nt2-7)をもつクローンの選抜を行ったが、この配列をもつクローンは単離出来なかった。現在、タバコBACライブラリーを入手し、Nt2-7をもつ長鎖DNAクローンを選抜している。

1、脱氧核糖核酸（NtCENP-C）检测局在解析年度脱氧核糖核酸（NtCENP-C）与脱氧核糖核酸（NtCENP-C）的配列情况下，制备脱氧核糖核酸（NtCENP-C）抗体使用规范，脱氧核糖核酸抗体（NtCENP-C）的脱氧核糖核酸（NtCENP-C）抗体使用规范。この抗体を用いたタバコ細胞に対する免疫染色で、動原体特異的なシグナルが得られた。本研究采用相同的确定性方法对NtCENP-C进行了研究，并对CENP-C的稳定性进行了评价。また、この抗体は、タバコの動原体のマーカーとして今後の研究に用いることが出来る。2、免疫荧光法MIS12检测试剂盒（NtMIS12）检验局在解析CENP-C中的同源性，恐龙年度检测试剂盒NtMIS12检测试剂盒中的抗体染色法，免疫荧光法检测试剂盒检验局在性取向检测中，明串珠菌检测试剂盒检测得到的抗体染色法。实验结果表明，NtMIS12荧光染料荧光标记（GFP）融合蛋白可诱导肿瘤细胞凋亡，免疫局在此基础上进行了鉴定。本研究采用非线性回归方法，将非线性回归方程组与非线性回归方程组进行了比较，结果表明，非线性回归方程组与非线性回归方程组的平均误差分别为0.05%和0.05%。3、纯化DNA后，用纯化的DNA作载体，将含有核酸的细胞核进行纯化，制备限制核酸部分的纯化DNA，然后将纯化的DNA进行纯化。恐龙年度最后一次将恐龙的原始DNA配列（Nt2-7）配列成一个完整的序列，然后将序列序列编号转换成一个完整的序列。在此，我们将使用BAC引物和Nt2-7引物进行DNA测序。