ヘテロクロマチン領域形成にかかわるDNA配列の解析

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昨年度に引き続き、ライムギの過剰へテロクロマチン領域に局在する縦列型反復配列であるJNKファミリー配列をもとにした、人工ヘテロクロマチン領域の作製を行った。昨年度作製した1.2kbの反復単位を7単位含むプラスミドインサートをライゲーションにより約200kbの長さに縦列連結し、長鎖DNAが維持可能なベクターへの挿入を試みた。しかし、導入した断片は大腸菌内では安定に維持されず、10kb程度になってしまった。大腸菌株やベクターを組換えを抑制しインサートの安定性を増すように設計されたものに変更し、同実験を試みたが同様な結果しか得られなかった。本研究室では日常的にPAC系のベクターを使った長鎖DNAライブラリーの作製が動いているにもかかわらず、他のヘテロクロマチン領域由来の他の縦列型反復配列で同様の実験を行っても同様な結果しか得られない。このことから、この種の配列は大腸菌内で安定に維持できないもしくは人工的に連結を行う系に問題があると考えられた。平行して、約200kb以上に人工連結したヘテロクロマチン領域由来の配列をクローン化せずに直接マウス細胞への導入を試みた。この実験においても長鎖DNAを含むサンプルははコントロールのプラスミドのみのものに比べて著しく低い形質転換効率しか得られなかった。高濃度に濃縮した長鎖連結DNAが形質転換の系に悪影響を及ぼしている可能性がある。得られた形質転換細胞の染色体観察を行ったが、付加的なヘテロクロマチン領域を示すものは得られなかった。