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染色体分配に必須な分裂期型キネトコア形成の分子基盤

染色体分离所必需的有丝分裂着丝粒形成的分子基础

基本信息

批准号：
22K20630
负责人：
竹之下憂祐
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20630/
关键词：
染色体分配動原体キネトコアセントロメア細胞分裂

项目摘要

キネトコアは、細胞分裂期に染色体を等しく分配するために、染色体と紡錘体微小管とを正しくつなぐ機能をもつ超分子複合体である。キネトコアがこの役割を遂行するためには、細胞周期の進行に伴って機能に適した形に構造を変える必要がある。実際に、紡錘体微小管と結合する細胞分裂期のキネトコアは、間期のキネトコアを形成するCENP-TにKMNと呼ばれる紡錘体微小管と結合するタンパク質複合体が結合することで形づくられる。しかし、この構造変化の制御機構はわかっていない。本研究は、CENP-TとKMNの分裂期特異的な結合に着目し、細胞生物学的解析とクライオ電子顕微鏡による構造生物学的解析とを組み合わせることで、どのようにして機能的な分裂期キネトコアが作られるのかを明らかにすることを目的としている。本年度は、まず、KMNの構成因子のひとつであるMis12複合体とCENP-Tとの複合体の構造予測をもとに培養細胞を用いた変異体解析をおこない、Mis12複合体とCENP-Tとの結合のふたつの結合界面を同定した。この内ひとつは、Mis12複合体のリン酸化により制御されていることを示唆する結果を得た。さらに、これらふたつの結合界面とは別の領域において、リン酸化されたCENP-TとMis12複合体とが結合することを示唆する結果も得ている。これらの結果から、CENP-TとMis12複合体の結合には少なくとも3つの結合界面があり、これらの結合はMis12複合体とCENP-Tそれぞれのリン酸化により協調的に制御されていると考えている。また、質量分析によるリン酸化部位の同定やクライオ電子顕微鏡によるMis12複合体とCENP-Tとの複合体の構造解析のため、細胞分裂期に同調した培養細胞からのタンパク質精製法の確立もおこなっている。

Chromosome distribution during cell division, chromosome spindle microtubule, supramolecular complex The structure of the cell cycle is necessary for the development of the cell cycle. During cell division, spindle microtubule binding occurs in the middle of the cell cycle and in the middle of the cell cycle. CENP-T, KMN and spindle microtubule binding occurs in the middle of the cell cycle. The structural transformation of the control mechanism is. This study focuses on the analysis of cell biology, electron microscopy, structural biology, and the combination of CENP-T and KMN's mitosis-specific functions. This year, the composition factors of KMN and the structure prediction of MIS12 complex and CENP-T complex were analyzed. The binding interface of MIS12 complex and CENP-T complex was determined. The results of this study were as follows: The binding interface between CENP-T and Mis12 complex and the binding interface between CENP-T and Mis12 complex are different. The result is that CENP-T and Mis12 complex are bound to each other at the interface between CENP-T and Mis12 complex, and CENP-T is bound to each other at the interface between CENP-T and Mis12 complex. Mass analysis, identification of acidified sites, electron microscopy, structural analysis of MIS12 complex, CENP-T complex, identification of isotropy during cell division, identification of acidified sites by mass purification