生細胞内(insitu)でタンパク質間の相互作用を解析・同定する新規な方法の開発

开发一种原位分析和鉴定蛋白质-蛋白质相互作用的新方法

• 批准号: 18770148
• 负责人: 山口 雄輝
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770148/
• 关键词: 生体高分子構造・磯能; ケミカルパイオロジー; クロスリンカー; タンパク質間相互作用; ブロテオーム解析; 生体高分子構造・機能; ケミカルバイオロジー; プロテオーム解析

本研究の目的は,生細胞内の目的タンパク質にケミカル(低分子化合物)を導入し,それを利用して近傍の生体分子を同定するという新しい相互作用因子解析法を開発することであり,そのためにまずin vitro のモデル系で検討を行った.転写伸長因子HDAgに,Cys残基を介して光活性化型クロスリンカーAETを導入し, RNAポリメラーゼIIのHDAg結合表面の決定を試みた. RN AポリメラーゼIIは12個のサブユニットからなる.解析の結果,HDAgはRNAポリメラーゼIIのRpblサブユニットのN末端およびRpb2サブユニットのむ末端と特異的にクロスリンクされることが分かった.これらの領域はRNAポリメラーゼIIの立体構造の中でクランプと呼ばれるドメインに相当することから, HDAgはRNAポリメラーゼIIのクランプに結合すると考えられ,転写伸長因子の作用を理解する上で重要な知見が得られた(Yamaguchiら2007).引き続いてin vivo の検討を行なったが,技術的な困難に直面し,期間内に有意義な成果を挙げることができなかった.そこで,これと平行して進めた研究の成果を代わりに報告する.アトラジンは世界で最も多く使われる除草剤の1つだが,植物だけでなく動物に対しても生殖器系などに悪影響を及ぼすことが指摘されている.アトラジンのこうした作用の分子機構を理解するため,アフィニティクロマトグラフィーの手法によりアトラジン結合タンパク質を探索したところ,ミトコンドリアのFIFO-ATP合成酵素が同定された.アトラジンは精子の運動性低下を引き起こすことが知られていたので,それについて調べたところ,アトラジンはFIFO-ATP合成酵素を阻害し,細胞内のATPプールを減少させることで,精子の運動性低下を引き起こすことは判明した(Haseら2008)

は の purpose, this study の project within living cells タ ン パ ク qualitative に ケ ミ カ ル (low molecular compound) を import し, そ れ を using し て nearly alongside の raw body molecular を be す る と い う new し い interaction factor analytic method を open 発 す る こ と で あ り, そ の た め に ま ず in vitro の モ デ ル department で 検 line for を っ た. Planning to write elongation factor HDAg に, Cys residue を interface し て type optical activeness ク ロ ス リ ン カ ー AET を import し, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II の HDAg combining surface の decided to try を み た. RN A ポ リ メ ラ ー ゼ II は 12 の サ ブ ユ ニ ッ ト か ら な る. Parsing の results, HDAg は RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II の Rpbl サ ブ ユ ニ ッ ト の N terminal お よ び Rpb2 サ ブ ユ ニ ッ ト の む end と specific に ク ロ ス リ ン ク さ れ る こ と が points か っ た. こ れ ら の field は RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II の three-dimensional structure in の で ク ラ ン プ と shout ば れ る ド メ イ ン に quite す る こ と か ら, HDAg は RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II の ク ラ ン プ に combining す る と exam え ら れ, planning to write elongation factors の を understand す る で on important な know see が ら れ た (Yamaguchi ら 2007). Cite 続 続 てin vivo Beg を の 検 line な っ た が, technology difficulty な に face し, な に during the meaningful results を 挙 げ る こ と が で き な か っ た. そ こ で, こ れ と parallel し て in め の た research を generation わ り に report す る. ア ト ラ ジ ン は more than the world's most で も く make わ れ る weeding tonic の 1 つ だ が, plant だ け で な く animal に し seaborne て も genital system な ど に 悪 influence を and ぼ す こ と が blame さ れ て い る. ア ト ラ ジ ン の こ う し の molecules た institutions を understand す る た め, ア フ ィ ニ テ ィ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の gimmick に よ り ア ト ラ ジ ン combining タ ン パ ク qualitative を explore し た と こ ろ, ミ ト コ ン ド リ ア の FIFO - ATP synthetase が be さ れ た. ア ト ラ ジ ン は essence Child の low motility を lead き up こ す こ と が know ら れ て い た の で, そ れ に つ い て adjustable べ た と こ ろ, ア ト ラ ジ ン は FIFO - ATP synthetase を resistance against し, の ATP in the cell プ ー ル を reduce さ せ る こ と で, low の sperm motility を led き up こ す こ と は.at し た (Hase ら 2008).

项目成果

Hepstitis Delta Virus

丁型肝炎病毒

• 发表时间: 2006
• 作者: Handa;H.;Yamaguchi;Y.(Ed.)
• 通讯作者: Y.(Ed.)

Evidence that SV40VP1-DNA interactions contribute to the assembly of 40-nm spherical viral particles

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2007.01134.x
• 发表时间: 2007-11-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Tsukamoto, Hiroko;Kawano, Masa-aki;Handa, Hiroshi
• 通讯作者: Handa, Hiroshi

NELF interacts with CBC and participates in 3'-end processing of replication-dependent histone mRNAs

NELF 与 CBC 相互作用并参与复制依赖性组蛋白 mRNA 的 3 端加工

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol Cell. 26
• 作者: Narita T;Yung T M C;Yamamoto J Tsuboi Y;Tanabe H;Tanaka K;Yamaguchi Y;Handa H
• 通讯作者: Handa H

Hepatitis delta antigen binds to the clamp of RNA polymerase II and affects transcriptional fidelity

丁型肝炎抗原与 RNA 聚合酶 II 钳结合并影响转录保真度

• 发表时间: 2007
• 期刊: Genes Cells. 12
• 作者: Yamaguchi Y;Mura T;Chanarat S;Okamoto S;Handa H
• 通讯作者: Handa H

Differential regulation of NF-kB by elongation factors is determined by core promoter type

延伸因子对 NF-kB 的差异调节取决于核心启动子类型

• 发表时间: 2007
• 期刊: Molecular and Cellular Biology 27・14
• 作者: Amir-Zilberstein;L.;Ainbinedr;E.;Taube;L.;Yamaguchi;Y.;Handa;H.;Dikstein;R.
• 通讯作者: R.