リンドウで見出された新規な外来遺伝子発現抑制現象の解明

阐明龙胆中发现的新型外源基因表达抑制现象

• 批准号: 18780023
• 负责人: 三柴 啓一郎
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780023/
• 关键词: リンドウ; 遺伝子導入; 発現抑制; DNAメチル化; Agrobacterium; 園芸学

本研究は,リンドウで見出された35Sプロモーターに特異的な発現抑制現象の解明を目的としている。本年度は35Sプロモーターの重要なエレメントであるas-1に結合する因子がDNAメチル化誘導に関与している可能性を検討するために,改変35Sプロモーターを導入した組換えリンドウを作出し,通常型35Sプロモーターと同様にDNAメチル化が引き起こされるかを調査した。as-1エレメントを改変した35Sプロモーター,また35SプロモーターのAドメイン(-90より下流)をリンドウやペチュニアのCHSコアプロモーター(G-boxを含む領域)に置換した改変プロモーターをsGFP遺伝子に連結したコンストラクトを作成し,アグロバクテリウム法でリンドウに導入した。得られた多数の組換え植物体より,シングルコピーでT-DNAが導入された系統をサザン解析により選抜した。これらシングルコピー系統について,導入された改変プロモーターからsGFP5側までの領域におけるメチル化シトシン配列の頻度を,Bisulfite法で解析した。その結果,通常型35Sプロモーター領域と同様に,調査した全ての系統で改変35Sプロモーター領域の高度なメチル化が確認された。このようにメチル化がas-1エレメントやコアプロモーター配列に非依存的に起きていることから,これらの配列はメチル化の引き金に直接的に関与していないものと考えられた。さらに非CG/CWG配列(CHH)におけるde novoメチル化頻度を詳細に解析したところ,as-1エレメントの5'側上流域において高頻度にde novoメチル化が起きていることが判明し,この領域が発現抑制の誘導に関わっていることが推察された。

The purpose of this study was to elucidate the specific な発appearance suppression phenomenon of された35S プロモーターに. This year's 35S プロモーターのimportant なエレメントであるAS-1に combinationする factor がDNA メチルinducing に relationship and している possibility を検するために, Modified 35S プロモーターをImported and replaced by えリンドウをmade, normal type 35 Sプロモーターと同様にDNAメチル化がinducedき出こされるかをinvestigationした. as-1エレメントを开変した35Sプロモーター,また35SプロモーターのをリンドウやペチュニアのCHSコアプロモーター(G-box contains the field) に した开変プロモーターをsGFP 伝子に连The result is the same as the original one. Get the most of the plant body, the T-DNA imported into the system, and the analysis of the plant.これらシングルコピーSystem について,import されたchange変プロモーターからsGFP5 sideまでの区におけるメチル化シトシンarrayのfrequencyを,Bisulfite methodでanalyticsした.そのResults, normal type 35S プロモーターfield と同様に, investigation した全てのThe system has been highly modified in the field of 35S プロモーター and has been confirmed.このようにメチル化がas-1 エレメントやコアプロモーター配arrayに Non-dependent に出きているThe ことから, the これらのmatching はメチル化の影き金に is directly connected with the していないものと卡えられた.さらにNon-CG/CWG arrangement (CHH)におけるde novo chemical frequency analysis in detail, as-1 エレメントの5' side upper basin high frequency analysis novoメチル化が开きていることがdeterminationし,この区が発appears to suppressのinducingに关わっていることがspecify and examineされた.