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わずか2時間で結果が出せる超迅速狂犬病ウイルス中和抗体価測定法の開発

开发出超快速狂犬病病毒中和抗体滴度测定方法，仅需2小时即可得出结果

基本信息

批准号：
18780228
负责人：
伊藤直人
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780228/
关键词：
狂犬病ウイルス中和抗体ルシフェラーゼ

项目摘要

本研究では,当初,ルシフェラーゼを含有した狂犬病ウイルス様粒子(VLP)を作製し,これを利用した迅速,安全かつ簡便な本ウイルス中和抗体価測定法の確立を試みてきた。これまでの研究により,ウイルスのヌクレオカプシドを構成するN蛋白質のC末端に外来蛋白質を融合した蛋白質は,ウイルス粒子内に取り込まれることが報告されている。そこで,平成18年度は,ルシフェラーゼ含有VLPを産生するためにN蛋白質-ルシフェラーゼ融合蛋白質の作製を行い,本融合蛋白質がウイルス粒子に取り込まれるか否かを検討した。しかし,N蛋白質-ルシフェラーゼ融合蛋白質がウイルス粒子内に取り込まれる効率は極めて低く,ルシフェラーゼ活性を基にVLP感染を定量することは困難と考えられた。そこで,本年度(平成19年度)は,この問題を解決するために,ルシフェラーゼ遺伝子をゲノムに組換えたG遺伝子欠損狂犬病ウイルスの作製を試みた。本ウイルスは,受容体結合蛋白質をコードするG遺伝子を欠損しているため,プラスミドからのG蛋白質の発現供給が無い限り,感染性子孫ウイルスを産生しない。本ウイルスを用いて,当初の計画通り,新しいウイルス中和抗体価測定法の確立を試みた。狂犬病ウイルスRC-HL株の遺伝子操作系を用いて,ルシフェラーゼ遺伝子組換えG遺伝子欠損狂犬病ウイルスの作製に成功した。同ウイルスの感染細胞では,接種したウイルス量に依存的なルシフェラーゼ活性検出された。したがって,この実験系を用いることにより,ウイルスの感染を容易に定量できることが明らかとなった。しかし,通常の中和抗体測定法に用いるウイルス量(200フォーカス形成単位)を接種した場合,明瞭なルシフェラーゼ活性が検出されるようになるのは接種後12時間であった。今後,より迅速にウイルス感染を検出するために,ルシフェラーゼ発光反応に用いる基質,用いる培養細胞の種類,ウイルス量等を検討する必要があると考えられた。

In this study, we initially attempted to establish a rapid, safe and simple method for the production of rabies virus particles (VLP). This study was carried out in the form of a fusion protein at the C-terminal of a protein and a fusion protein at the C-terminal of a protein. In 2018, the production of fusion protein containing VLP was carried out, and the fusion protein was investigated for its particle selection. N-protein fusion proteins are difficult to quantify in vivo. This year, we will try to solve the problem of rabies by organizing and improving the treatment of rabies. The receptor binding protein G gene is deficient in protein expression and there is no limit to the production and supply of G protein, and infectious offspring are produced. This article introduces the establishment of a new neutralizing antibody assay for the detection of anti-HIV antibodies. Rabies RC-HL strain gene operator system was successfully used to control rabies RC-HL strain. In addition, the infection rate depends on the number of cells inoculated. It is easy to quantify the infection caused by this disease. In the case of inoculation, the activity of the neutralizing antibody assay was detected 12 hours after inoculation with a total dose of 200 mg/kg. In the future, it is necessary to investigate the rapid detection of infection, the use of medium, the type and amount of cultured cells, etc.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Involvement of nucleoprotein, phosphoprotein, and matrix protein genes of rabies virus in virulence for adult mice.

DOI：
10.1016/j.virusres.2006.08.011
发表时间：
2007-02
期刊：
Virus research
影响因子：
5
作者：
K. Shimizu;N. Ito;Tetsuo Mita;Kentaro Yamada;Junji Hosokawa-Muto;M. Sugiyama;N. Minamoto
通讯作者：
K. Shimizu;N. Ito;Tetsuo Mita;Kentaro Yamada;Junji Hosokawa-Muto;M. Sugiyama;N. Minamoto

Molecular epidemiology of rabies in Indonesia

DOI：
10.1016/j.virusres.2008.03.001
发表时间：
2008-07-01
期刊：
VIRUS RESEARCH
影响因子：
5
作者：
Susetya, Heru;Sugiyama, Makoto;Minamoto, Nobuyuki
通讯作者：
Minamoto, Nobuyuki

狂犬病ウイルスの病原性に関する研究の進展

狂犬病病毒发病机制研究进展

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
ウイルス 57
影响因子：
0
作者：
Mubita C;Syakalima M;ChisengaC;Munyeme M;Bwalya M;Chifumpa G;Hangombe BM;Sinkala P;Simuunza M;Fukushi H;Isogai I;Yasuda J;Isogai E;T. Yamaguchi;森中定治;K. Shimizu;伊藤直人
通讯作者：
伊藤直人

Epidemiology of rabies in Asia and develoPment of new-generation vaccines for rabies

亚洲狂犬病流行病学和新一代狂犬病疫苗的开发