薬物代謝酵素を用いる検出指向誘導体化法の開発

开发利用药物代谢酶的检测导向衍生化方法

• 批准号: 18790024
• 负责人: 後藤 貴章
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790024/
• 关键词: 検出指向誘導体化; 質量分析法; エレクトロスプレーイオン化; ステロイド; 硫酸エステル; 硫酸転移酵素; 衝突誘起解離; 固定化酵素

まず、前年度合成した各種硫酸抱合型ステロイド標品を用い、エレクトロスプレーイオン化(ESI)-タンデム質量分析法(MS/MS)におけるフラグメントの様相を定性的観点から精査した。モデル化合物として取り上げた5種の硫酸抱合型ステロイド(デヒドロエピアンドロステロン、プレグネノロン、エストロン、テストステロン、リトコール酸の各硫酸抱合体)は、いずれも脱プロトン化分子を効率良く生成した。さらに、それらの脱プロトン化分子は、低エネルギー衝突誘起解離(CID)条件下においてそれぞれの構造に特徴的なm/z 80,96,97のイオンを生成した。このことから、硫酸エステル化は、特異性向上のみならず、ステロイドの構造推定にも有用な情報を与えることを明らかにした。ついで、リコンビナントの硫酸転移酵素(SULT2A1)を用い、その誘導体化用機能性試薬としての可能性につき、検討を加えた。PAPS(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate)を含むリン酸ナトリウム緩衝液中、不溶性担体に固定化したSULT2A1によるデヒドロエピアンドロステロンの誘導体化に検討を加えたところ、緩和な条件下で硫酸化が定量的に進行することが判明した。さらに、固定化SULT2A1の安定性を評価したところ、4℃で保存するとき、40日後においても80%以上の活性を維持していた。また、繰り返し使用により僅かな活性の低下が認められたものの、5回使用後においても固定化直後の80%以上の活性を有することが明らかになった.

In the past year, the synthesis of various sulfuric acid inclusion type standard products was carried out in the middle of the application, and the quality of the product phase was carefully investigated by ESI-MS mass spectrometry (MS/MS). The five kinds of sulfuric acid complexes (sulfuric acid complexes) of the above five kinds of sulfuric acid complexes were selected from the above five kinds of sulfuric acid complexes, and the middle kind of sulfuric acid complexes were produced with good efficiency. Under the condition of CID (Conflict Induced Dissociation), the structural characteristics of m/z 80, 96 and 97 are generated. This is the first time I've ever seen a woman's face. In addition, the functional test for the induction of sulfate transfer enzyme (SULT2A1) can be carried out. We have conducted further discussions on the induction of UDRODENDROSTRON by PAPS(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate) immobilized on SULT2A1 on an insoluble support in a buffer solution containing linolic acid, and it has been found that sulfation can be carried out quantitatively under mild conditions. The stability of immobilized SULT 2A1 was evaluated at 4℃, and the activity was maintained above 80% after 40 days. After 5 cycles of use, more than 80% of the activity was observed after immobilization.

项目成果

LC/ESI-Tandem mass spectrometric determination of bile acid 3-sulfates in human urine. 3β-Sulfooxy-l2α-hydroxy-5β-cholanoic acid is an abundant nonamidated sulfate

LC/ESI-串联质谱法测定人尿液中的胆汁酸 3-硫酸盐 3β-磺氧基-12α-羟基-5β-胆烷酸是一种丰富的非酰胺化硫酸盐。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Chromatography B 846
• 作者: Toshiaki Sunazuka;Masaki Handa;Tomoyasu Hirose;Takanori Matsumaru;Yuko Togashi;Kaoru Nakamura;Yuzuru Iwai;Satoshi Omura;Seikou Nakamura;Seikou Nakamura;Seikou Nakamura;中村 誠宏;Takaaki Goto;Takaaki Goto
• 通讯作者: Takaaki Goto

A direct method for the separation and quantification of bile acid acyl glycosides by high-performance liquid chromatography with an evaporative light scattering detector

蒸发光散射检测器高效液相色谱直接分离和定量胆汁酸酰基苷的方法

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Chromatography A 1125
• 作者: Kakehi K;et. al.;Genta Kakiyama
• 通讯作者: Genta Kakiyama

Regioselective oxyfunctionalization of unactivated carbons in steroids by a model of cytochrome P-450 : Osmiumporphyrin complex/tert-butylhydroperoxide system

通过细胞色素 P-450 模型对类固醇中未活性碳进行区域选择性氧功能化：锇卟啉复合物/叔丁基过氧化氢系统

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Organic Chemistry 72
• 作者: Toshiaki Sunazuka;Masaki Handa;Tomoyasu Hirose;Takanori Matsumaru;Yuko Togashi;Kaoru Nakamura;Yuzuru Iwai;Satoshi Omura;Seikou Nakamura;Seikou Nakamura;Seikou Nakamura;中村 誠宏;Takaaki Goto;Takaaki Goto;Masayuki Ando;Genta Kakiyama;Genta Kakiyama;Takashi Iida
• 通讯作者: Takashi Iida

Identification of a novel bile acid in swans, tree ducks, and geese:: 3α, 7α, 15α-trihydroxy-5β-cholan-24-oic acid

• DOI: 10.1194/jlr.m600149-jlr200
• 发表时间: 2006-07-01
• 期刊: JOURNAL OF LIPID RESEARCH
• 影响因子: 6.5
• 作者: Kakiyama, Genta;Iida, Takashi;Hofmann, Alan F.
• 通讯作者: Hofmann, Alan F.