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新規循環調節ペプチドの探索と機能解析に関する研究

新型循环调节肽的筛选及功能分析研究

基本信息

批准号：
18790212
负责人：
吉田守克
金额：
$ 2.18万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は循環器系に発現するオーファン受容体の内因性リガンドを探索,同定し,新たな循環調節機構を提示することを目的とした。1.昨年度に引き続き,循環器系に発現する3種類のオーファン受容体(GPR19,GPR37L1,PGR7)発現細胞を用いて新規生理活性ペプチドの探索を遂行した。各種動物組織から調製したペプチド抽出物を細胞に添加後,細胞内cAMP濃度変動を指標に新規ペプチド性リガンドを探索した。昨年度実施した細胞内Ca^<2+>濃度上昇を指標とした探索と同様に,オーファン受容体の活性化に伴う特異的な活性を見出すことはできなかった。原因として,リガンドと予想されるペプチドの組織含量が低いことが考えられる。そこで,従来の100倍濃縮したサンプルを用いたアッセイ系を構築し,探索を現在進めている。2.今まで申請者は探索を進めていく中で,内因性受容体に作用する種々の既知ペプチドを同定している。そこで内因性受容体由来のシグナルを減弱させるために,受容体と結合するために必須であるGα(Gαq,Gαs,Gαi)タンパク質のC末端断片(Gα-minigene)を作製し,HEK293やCHO細胞に一過性に発現させた。内因性受容体由来のシグナルを若干減弱できたものの,目的である標的受容体由来のシグナルのみを検出できるアッセイ系は構築できなかった。原因として,リガンド添加に伴う細胞内Ca^<2+>,cAMP濃度変動の検出系が高感度であることが考えられる。現在,生理活性ペプチドに作用する内因性受容体の少ないjurkat細胞に標的オーファン受容体を発現させ,内因性受容体由来のシグナルが少ないアッセイ系を構築し,探索を進めている。今後オーファン受容体のリガンド探索に関わる諸問題を解決するために,a)リガンドソースの改善,b)内因性受容体由来のシグナル除去,c)受容体のソーディングに対するする改善を遂行する。

This study aims to explore the intrinsic characteristics of the circulation system, and to determine the new circulation regulation mechanism. 1. In the past year, three kinds of receptors (GPR19,GPR37L1,PGR7) were developed in the cycler system, and new physiological activities were explored. After the addition of extracts from various animal tissues, the intracellular cAMP concentration changes and the new selection criteria are explored. In the past year, the intracellular Ca^+> concentration increased, and the activity of the receptor was accompanied by specific activity. The reason for this is that the tissue content is low. In addition, the 100-fold concentration of the product is used to construct the system and explore the current situation. 2. The applicant is now exploring the role of endogenous receptors in the process of determining the identity of the candidate. The origin of endogenous receptor is weakened, and receptor binding is necessary to control the C-terminal fragment (Gα-minigene) of receptor, which is transiently present in HEK293 and CHO cells. The origin of endogenous receptors is a number of weak points, the purpose of which is to construct the origin of endogenous receptors. The reason is that the increase of Ca^<2+> and cAMP concentration in cells is accompanied by high sensitivity. At present, the physiological activity of the endogenous receptor of the role of small jurkat cell target receptor development, the origin of endogenous receptor system construction, exploration and progress. In the future, the problems related to the exploration of the receptor will be solved,a) the improvement of the receptor solution,b) the elimination of the intrinsic receptor origin,c) the improvement of the receptor solution.