NAF1によるHIV-1増殖抑制メカニズムの解析

NAF1抑制HIV-1生长的机制分析

• 批准号: 18790320
• 负责人: 山本 典生
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790320/
• 关键词: NAF1; HIV-1; HIV; nef

HIV-1 LTRの転写にNAF1が与える影響を調べてみたところ、LTRの転写をNAF1は抑制することが明らかとなった。さらに抑制能に関与するドメインを調べるために変異体を作製して調べたところ、コイルドコイルの2番目と4番目にそのようなドメインがあることが明らかとなった。これらのドメインはHIV-1 nefとの結合性も有しており、LTRの抑制とどのように関連するのか興味深い。また、NAF1を強制発現させた細胞へのシングルラウンド感染系に、リアルタイムPCR法を用いてreverse transcription, integrationの各ステップがNAF-1によって影響を受けるかどうか検討を行ったところ、NAF-1はreverse transcription効率に影響を与えないが、integration効率を低下させることが明らかとなった。さらにNAF-1は2LTR DNAの量も減少させることから、核移行のステップがNAF-1の標的である可能性が示唆された。次に、NAF1に対するshRNA発現ベクターを作成し、NAF1をknock downした細胞(Jurkat/NAFi,293/NAFi)を樹立した。endogenous NAF1の発現レベルを確認するにはanti-NAF1抗体が必要であるが、この目的には研究代表者が作成した抗体が非常に有効であった。樹立したJurkat/NAFi,293/NAFiを用いてHIV-1の増殖に与える影響を調べたところ、意外にもシングルラウンド感染系を用いた実験では、NAF1をknock downした細胞でHIV-1の増殖抑制が観察された。どのようなメカニズムによってこのような現象が起こるのか、今後より詳細な解析が必要である。

HIV-1 LTR and NAF 1 are closely related to HIV-1 infection. The two sides of the border are facing each other. The two sides of the border are facing each other. The association between HIV-1 nef and LTR is of great interest. NAF-1 stress is detected in the infected cells, and the reverse transcription, integration, and reverse transcription efficiency of NAF-1 are affected by the reverse transcription, integration, and reverse transcription efficiency. The decrease in the amount of NAF-1 and 2LTR DNA was also demonstrated by the possibility of nuclear migration. Next, NAF1 knocked down the cells (Jurkat/NAFi,293/NAFi). The discovery of endogenous NAF1 is necessary for the purpose of research on behalf of the antibody. The establishment of Jurkat/NAFi,293/NAFi in the use of HIV-1 proliferation and the impact of regulatory, accidental and regulatory infection lines in the use of NAF1 knock down cells HIV-1 proliferation inhibition. The phenomenon of

项目成果

Lentivirus vectors expressing short hairpin RNAs against the U3-overlapping region of HIV nef inhibit HIV replication and infectivity in primary macrophages

• DOI: 10.1182/blood-2006-04-014829
• 发表时间: 2006-11-15
• 期刊: BLOOD
• 影响因子: 20.3
• 作者: Yamamoto, Takuya;Miyoshi, Hiroyuki;Tsunetsugu-Yokota, Yasuko
• 通讯作者: Tsunetsugu-Yokota, Yasuko