EBVにコードされた小RNA(EBERs)による悪性形質転換メカニズムの解析

EBV编码的小RNA（EBERs）恶性转化机制分析

• 批准号: 13770148
• 负责人: 山本 典生
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770148/
• 关键词: EBV; SAGE; 悪性形質転換

研究代表者は、EBVによる悪性形質転換のメカニズムを明らかにするために、SAGE法(Serial Analysis of Gene Expression)を行った。SAGE法で発現に差のあった遺伝子についてノーザンプロット法、定量的リアルタイムPCR法、ウエスタンブロット法を用いてRNAレベルおよびタンパク質レベルでの発現を確認した。その中でも発現の差が顕著であったひとつについて特に注目し、BJAB細胞に導入して悪性形質転換が起こるかどうかの確認を行った。遺伝子導入にはエレクトロポレーション法を用い、発現の確認にはHAタグに対するウエスタンブロット法を用いた。遺伝子導入された細胞は10%FCS存在下および0.1%FCS存在下でより高い増殖能を示した。更に軟寒天中でのコロニー形成能およびスキッドマウス皮下での腫瘍形成能も大幅に上昇した。遺伝子導入された細胞とコントロール細胞に対してマイトマイシンC処理・紫外線処理を行い、アポトーシスがどの程度起こるかについて検討したところ、遺伝子導入細胞ではコントロール細胞に比べて強いアポトーシス抵抗性が観察された。BJAB細胞以外の細胞株でも同様の現象が観察されるか否かを確認するため、バーキットリンパ腫由来のEBV陽性細胞株であるDaudi細胞、Mutu I細胞に対して限界希釈法を用い、EBV陰性細胞株を樹立した。そのうちのMutu I-EBV(-)にSAGE法によって同定された遺伝子を導入したところ、BJAB細胞と同様の結果が得られた。また、この遺伝子の発現を減少させるためにRNAiやantisenseを用いた実験を行ったところ、この遺伝子産物の減少が細胞死を誘導することが示唆された。以上の結果を総合し、研究代表者は細胞の悪性化においてこの遺伝子が何らかの重要な役割を果たしていると考えている。

The representative of the research, the EBV, the representative of the research, the representative of the research The SAGE method shows that there is a significant difference between the two methods, such as the RNA method, the quantitative method, the method and the method. In the middle of the day, you can see that you have to pay special attention to the situation, and that the BJAB cell is interested in your sexuality and that you are sure to do so. Please make sure that the HA method is used and that the method is used. In the presence of 10%FCS in the presence of 0.1%FCS, the ability to reproduce in the presence of high temperature indicates that it is possible to reproduce. In the cold weather, the formation of the skin is much higher than that of the skin. Do you want to know if you want to know how to do something about the UV line? do you want to know how to do something about the UV line? if you don't know how to do it, you need to know how much you want to know about it. The BJAB extracellular cell lines were detected in the same way as those in the same cell line, and whether they were confirmed or not. The origin of the EBV cell line was the Daudi cell line, the Mutu I cell line, the EBV cell line, and the EBV cell line. The Mutu I-EBV (-) SAGE method was used to determine the accuracy of the test data, and the results of the BJAB cell test were the same as those of the control group. Please tell me that you need to RNAi your antisense to show that your child is dead and that you are instigated to do so. As a result of the above results, the representative of the research group, the representative of the research, has made a study of how important it is to cut the results of the study.