プロテオミクスによる遺伝性自己免疫疾患の原因タンパク質の機能解析

使用蛋白质组学对遗传性自身免疫性疾病的蛋白质进行功能分析

基本信息

批准号：
18790340
负责人：
押川清孝
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyushu University (2007)The University of Tokushima (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790340/
关键词：
自己免疫疾患 AIRE 胸腺上皮細胞プロテオミクス MHC

项目摘要

自己寛容(self-tolerance)の成立機構に重要な役割を果たしているAIREタンパク質は、胸腺上皮細胞の核内に存在し、構造上の特徴から転写調節因子として働くと考えられている。一般に、核内転写調節因子は他のタンパク質と協調して機能を発揮するため、AIREと相互作用するタンパク質群を同定することは、AIREの機能を明らかにする上で必須であると考えられる。他方、前研究室ではAIREがユビキチン連結酵素(E3 ligase)であることを明らかにしているが、その基質タンパク質の同定には至っていない。これらの点をふまえ、本年度はAIREと相互作用するタンパク質群の探索を行った。具体的にはAIRE遺伝子を胸腺上皮細胞株へと導入し、AIREタンパク質を恒常的に発現させた後、細胞核画分を抽出し、AIREに付加したタグによる免疫沈降を行い、AIREを含むタンパク質複合体を回収した。得られたタンパク質複合体中の微量タンパク質検出のためにSDS-PAGEで分離せず、直接マススペクトロメトリー(質量分析計)にて同定した。現在、同定したAIREタンパク質複合体候補分子群の確認作業を行っており、今後AIREタンパク質複合体の組成が明らかとなった場合には、これらタンパク質の相互作用の形態や結合部位についても検討する。また、得られたAIRE相互作用タンパク質の情報を元に、AIREによって転写調節を受ける遺伝子群の探索を開始する。以上の研究の進展により、AIREと生理的に相互作用するタンパク質が同定できれば、自己免疫疾患発症機構の解明に有力な手がかりとなるのみならず、自己寛容の成立機構の本態に迫ることができる。

在胸腺上皮细胞的核中发现了AIR蛋白在自我耐受机制中起重要作用，由于其结构特征，因此被认为是转录调节剂。通常，核转录调节剂与其他蛋白质一致发挥作用，因此鉴定与AIRE相互作用的蛋白质群在阐明AIRE功能时被认为是必不可少的。另一方面，先前的实验室表明，AIRE是链接酶（E3连接酶）的泛素，但尚未鉴定其底物蛋白。考虑到这些观点，我们搜索了今年与AIRE相互作用的蛋白质组。具体而言，将AIRE基因引入了胸腺上皮细胞系中，并将AIRE蛋白组成性表达，并提取细胞核分数，并使用附着在AIRE上的TAG进行免疫沉淀，并收集含有AIRE的蛋白质复合物。为了检测所得蛋白质复合物中的痕量蛋白，它们不会被SDS-PAGE分离，而是直接通过质谱法（质谱仪）鉴定。目前，我们正在开展工作以确认已鉴定的AIRE蛋白质复合物候选分子，如果将来AIRE蛋白质复合物的组成变得清晰，我们还将考虑这些蛋白质与结合位点之间相互作用的形式。此外，基于有关AIRE相互作用蛋白的获得的信息，搜索了由AIRE转录调节的基因。随着上述研究的进步，如果可以识别与AIR的生理相互作用的蛋白质，它们不仅将为阐明自身免疫性疾病发展机制提供强大的线索，而且还将能够仔细研究建立自负的机制的真实本质。