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下垂体に存在する体性幹細胞の探索とその遺伝子解析

寻找垂体中存在的成体干细胞及其遗传分析

基本信息

批准号：
18790740
负责人：
神田靖士
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790740/
关键词：
下垂体 SP細胞組織幹細胞幹細胞

项目摘要

下垂体幹細胞に特異的に発現する遺伝子の機能解析昨年度にDNAアレイを用いた発現遺伝子の網羅的解析によって、下垂体細胞のSP画分にMP画分と比較して発現量の高い遺伝子を数種類見いだした。そのうちの2種類の遺伝子(Factor XとY)についてそれらの遺伝子のORFをクローニングしてテトラサイクリンで発現を制御可能な系を用いてマウスのES細胞に遺伝子導入を行った。Stable ce11 1ineを取得した後に、テトラサイクリンを用いて遺伝子発現を調節し14日間培養後にwild typeとの比較をLIF非存在下において行った。その結果、未分化のマーカー遺伝子の発現をRT-PCRを用いて確認したところ、wildtypeと比較してfactor Xを導入したものの方が未分化マーカーの発現が強くまた持続する傾向にあった。また神経などの分化マーカーの発現はほとんど検出できなかった。このことより、このfactor Xは下垂体のSP細胞に特異的に発現する遺伝子であり、その機能としては未分化状態を維持するために必要な一要因であることが示唆された。下垂体幹細胞の多分化能の検討in vitroにおいて、下垂体細胞を採取し幹細胞が生育可能な培養条件下において培養を行った。その後、sphereを形成し、再度トリプシンなどで細胞をシングルセルにした後に、培養を行うとセカンドsphereの形成が確認された。またsphereを形成した細胞を用いて分化誘導を行ったところ、神経細胞などのマーカー遺伝子の確認がRT-PCR及び免疫染色にて確認された。これらの結果より、下垂体細胞中に組織幹細胞の存在が確認され、多分化能も有することが示唆された。総括今回の研究の成果により、再生医療を応用した組織幹細胞を用いた内分泌代謝異常の患者に対する治療の可能性を基礎的なデータだけではあるが示すことができた。

Functional analysis of specific gene expression in pituitary stem cells. Analysis of gene expression in pituitary stem cells. Comparison of SP and MP profiles of pituitary stem cells. 2 kinds of genes (Factor X and Y) are introduced into ES cells. Stable ce11 1ine after acquisition, in use, in the development of seed regulation after 14 days of culture, in the wild type, in the absence of LIF The result is that the expression of undifferentiated genes is strongly correlated with the expression of wildtype genes.また神経などの分化マーカーの発现はほとんど検出できなかった。This factor X is essential for the specific development of SP cells in the pituitary gland and for maintaining their functions in an undifferentiated state. The multi-differentiation potential of pituitary stem cells was studied in vitro, and pituitary cells were collected and cultured under conditions where stem cells were fertile. After the formation of the sphere, the formation of the sphere was confirmed. Cell differentiation was confirmed by RT-PCR and immunostaining. The results showed that the existence of tissue stem cells in hypophysis cells was confirmed, and the existence of pluripotent stem cells was demonstrated. The results of current research indicate the possibility of using tissue stem cells in patients with endocrine and metabolic disorders.