化学・放射線療法が必要な若年女性患者の卵巣機能温存のための卵巣凍結保存技術の確立

建立卵巢冷冻保存技术以保护年轻女性化疗/放疗患者的卵巢功能

• 批准号: 18791151
• 负责人: 清水 良彦
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791151/
• 关键词: 卵巣凍結; 医療福祉; 生殖医学

(1)CASを用いて凍結したマウス卵巣の生殖能力の検討。Green Fluorescent Protein(GFP)を全身に発現するトランスジェニックマウスから卵巣を摘出、凍結する技術を確立した。また、1週間マイナス80度にて保存した後、融解し、野生型レシピエントマウスへ他家移植する技術もほぼ確立した。(2)CASを用いて凍結したマウス卵子、顆粒膜細胞、莢膜細胞の細胞膜の形態的変化の検討。CASを用いて凍結・融解した卵巣を透過型電子顕微鏡で観察する方法を検討中である。(3)CASを用いて凍結・融解したマウス卵子のアクチン細胞骨格と微小管の観察。CASを用いて凍結・融解した卵巣の切片を4%パラホルムアルデヒドで固定し、ファロイディンでアクチンを染色し、コンフォーカル顕微鏡で観察した。凍結していないコントロールの卵巣と今のところ細胞骨格に違いを認めず、凍結の細胞骨格への影響は少ないと考えている。(4)CASで凍結したマウス卵巣から顆粒膜細胞の分離、初代培養。レシピエントマウスを過排卵処理したのち、屠殺、開腹し、卵管より顆粒膜細胞と卵を回収し、ピペットで顆粒膜細胞と卵を分離した後、遠心分離して顆粒膜細胞のみを回収することに成功した。今後はフローサイトメトリーでGFPが蛍光された顆粒膜細胞のみを回収し、血清を添加した培養液で初代培養する。すなわち、CASで凍結した顆粒膜細胞のみを回収する技術を確立中である。

(1) CAS is used to determine the reproductive ability of eggs. Green Fluorescent Protein (GFP) can make sure that the eggs are picked out and the technology is used to make sure that the eggs are removed. After being preserved at 80 degrees Celsius within 1 minute, melt and wild-type cryostat will be used to make sure that his home transplant technology and technology equipment. (2) CAS uses the chemical structure of egg, granule membrane cell, membrane cell and cell membrane. The CAS method was used to lyse the eggs by using the method of scanning electron micrometer. (3) CAS examines the microtubules in the cellular bone lattice by melting the eggs. CAS slices eggs into 4% slices, which are fixed, fixed, stained, and microscopically observed. I don't know what to do. I don't know. I don't know. (4) CAS eggs were isolated and cultured in primary culture. After ovulation, ovulation, laparotomy, oviduct ovulation, granulomembrane cell culture, egg isolation, heart separation, granulocyte membrane cell isolation, ovulation, ovulation, ovulation From now on, we will tell you that we need to GFP the cells of the granule membrane and add the culture solution to the serum for primary culture. The technique was used to determine the accuracy of the technique. CAS was used to determine the accuracy of the technique.