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霊長類角膜内皮細胞の増殖制御機構の解明

阐明灵长类角膜内皮细胞的增殖控制机制

基本信息

批准号：
18791305
负责人：
小泉範子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Doshisha University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791305/
关键词：
眼科角膜内皮細胞細胞周期制御分子霊長類

项目摘要

【目的】霊長類の角膜内皮細胞は生体内ではほとんど増殖しない一方で、生体外で適切な条件で培養することにより増殖させることが可能である。今回、カニクイザルの培養角膜内皮細胞におけるDNA/RNA同時測定による培養角膜内皮細胞の細胞周期解析を行い、さらに細胞周期制御分子の発現を免疫組織化学的手法により検討したので報告する。【方法】カニクイザル培養角膜内皮細胞を継代培養し、1サンプル当たり3000個の細胞をHoechst33342とPyronin Yにて染色後、In Cell Analyzer 1000^<[○!R]>を用いてDNAとRNAの同時測定を行い細胞周期解析を行った。また、p16、p21、p27、p53、リン酸化p53に対する免疫染色を行い、角膜内皮細胞における細胞周期制御分子の発現を検討した。【結果】In Cell Analyzer 1000^<[○!R]>により培養角膜内皮細胞の細胞周期の解析(G0期:6%、G1期:89%、S,G2,M期:6%)が可能であった。また、免疫染色によりすべての細胞にp16、p21、p27の発現が認められた。p53の発現が認められたが、リン酸化p53の発現は認められなかった。【結論】カニクイザル角膜内皮細胞の培養条件下における細胞周期解析が可能であった。また、細胞周期制御分子を介して細胞増殖が抑制されていることが示唆され、霊長類の角膜内皮細胞増殖を制御する因子の解明に有用であると考えられた。

[Purpose] The proliferation of epithelial corneal endothelial cells in vivo is carried out. It is possible to cultivate and reproduce under appropriate conditions in vitro. This time, the results of simultaneous DNA/RNA measurement of corneal endothelial cells cultured by Kareem and corneal endothelial cells Report on cell cycle analysis and analysis of cell cycle control molecules and immunohistochemistry. [Method] Corneal endothelial cells were cultured in corneal endothelial cells and cultured, 1 サンプルたり3000 cells were stained with Hoechst 33342 and Pyronin Y, and then stained in Cell Analyzer 1000^<[○!R]>Use DNA and RNA to simultaneously measure and analyze cell cycle.また, p16, p21, p27, p53, リン acidified p53 に対するimmunostaining を行い, corneal endothelial cells におけるcell cycle control molecule の発appears を検した. 【Result】It is possible to analyze the cell cycle of corneal endothelial cells cultured in Cell Analyzer 1000^<[○!R]>(G0 phase: 6%, G1 phase: 89%, S, G2, M phase: 6%).また、Immunostaining によりすべてのcells にp16, p21, p27 の発appear がめられた. p53の発appearsがcognizeめられたが, リンacidification p53の発appearsはcognizesめられなかった. [Conclusion] It is possible to perform cell cycle analysis under the culture conditions of corneal endothelial cells.また, cell cycle control molecule を mediated して cell proliferation が inhibition されていることが indication され, The factors that control the proliferation of corneal endothelial cells of the genus are useful in explaining the secretion of the factor.