霊長類角膜内皮細胞の増殖制御機構の解明

阐明灵长类角膜内皮细胞的增殖控制机制

基本信息

批准号：
18791305
负责人：
小泉範子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Doshisha University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18791305/
关键词：
眼科角膜内皮細胞細胞周期制御分子霊長類

项目摘要

【目的】霊長類の角膜内皮細胞は生体内ではほとんど増殖しない一方で、生体外で適切な条件で培養することにより増殖させることが可能である。今回、カニクイザルの培養角膜内皮細胞におけるDNA/RNA同時測定による培養角膜内皮細胞の細胞周期解析を行い、さらに細胞周期制御分子の発現を免疫組織化学的手法により検討したので報告する。【方法】カニクイザル培養角膜内皮細胞を継代培養し、1サンプル当たり3000個の細胞をHoechst33342とPyronin Yにて染色後、In Cell Analyzer 1000^<[○!R]>を用いてDNAとRNAの同時測定を行い細胞周期解析を行った。また、p16、p21、p27、p53、リン酸化p53に対する免疫染色を行い、角膜内皮細胞における細胞周期制御分子の発現を検討した。【結果】In Cell Analyzer 1000^<[○!R]>により培養角膜内皮細胞の細胞周期の解析(G0期:6%、G1期:89%、S,G2,M期:6%)が可能であった。また、免疫染色によりすべての細胞にp16、p21、p27の発現が認められた。p53の発現が認められたが、リン酸化p53の発現は認められなかった。【結論】カニクイザル角膜内皮細胞の培養条件下における細胞周期解析が可能であった。また、細胞周期制御分子を介して細胞増殖が抑制されていることが示唆され、霊長類の角膜内皮細胞増殖を制御する因子の解明に有用であると考えられた。

[客观]虽然灵长类的角膜内皮细胞几乎不会在体内生长，但可以通过在体外适当的条件下培养它们来种植它们。我们报告说，我们通过同时使用免疫组织化学技术的细胞周期调节分子的表达进行了同时的DNA/RNA测量，对Cynomolgus猴子培养的角膜内皮细胞进行了细胞周期分析。 [方法]将cynomolgus猴子培养的角膜内皮细胞进行亚培养，并用Hoechst33342和吡咯蛋白染色3,000个细胞，然后在细胞分析仪中同时测量DNA和RNA，然后在细胞分析仪1000^<[[○！r]中同时测量DNA和RNA，以分析细胞周期。另外，对P16，P21，P27，P53和磷酸化的p53进行免疫染色，研究了角膜内皮细胞中细胞周期调节分子的表达。 [结果]细胞分析仪1000^<[○！r]>允许分析培养的角膜内皮细胞的细胞周期（G0期：6％，G1期：89％，S，G2，M期：6％）。此外，免疫染色显示所有细胞中p16，p21和p27的表达。观察到p53的表达，但未观察到磷酸化的p53。 [结论]细胞周期分析在cynomolgus猴子角膜内皮细胞的培养条件下可能是可能的。它还表明细胞增殖通过细胞周期控制分子抑制，被认为在调节灵长类动物中角膜内皮细胞增殖的阐明因子中很有用。