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天然生理活性素材による間葉系幹細胞の骨芽細胞への分化に関連する遺伝子群の解析

利用天然生理活性物质分析与间充质干细胞分化为成骨细胞相关的基因

基本信息

批准号：
18791404
负责人：
山田志津香
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、キトサンモノマーを培地に添加して、間葉系幹細胞(MSC)のアルカリフォスファターゼ活性を測定した結果、骨芽細胞への分化に殆ど影響を与えないことが判明した。そのため、今年度はモノマーよりも分子量の大きいオリゴマー、ポリマーを用いてMSCの骨芽細胞分化に対する影響を調査した。まず、FGF添加のDMEM(10%FBS、ペニシリンストレプトマイシン添加)維持培地にて60mm皿にMSCを播種し培養を行った。細胞がコンフルエントになった時点で、一般的な骨分化誘導培地(維持培地+10^<-7>Mデキサメタゾン+10mMグリセロリン酸+50μg/mlアスコルビン酸)ならびに維持培地にモノマー、オリゴマー、ポリマーをそれぞれ添加した培地に置換した。各群とも最終濃度が0.005%、0.0005%、0.00005%になるようキトサンを添加した。培養10日、15日、20日目にアリザリンレッド染色、Ca定量法にてMSCの骨分化誘導を評価した。一般的な骨分化誘導培地において、培養10日目でMSCはアリザリンレッドにより薄く染色され、15日、20日目でいずれも濃く染色されたが、モノマー、オリゴマー、ポリマーにおいては培養10日、15日、20日目のいずれも殆ど染色されなかった。また、Ca定量に関しては一般的な骨分化誘導培地において15日、20日目で有意差が認められたが、その他のキトサン添加培地においては有意差を認めなかった。以前の研究でヒト骨芽細胞に対してキトサンはその増殖・分化に好影響を与えたことを証明したが、本研究でキトサンはMSCの骨芽細胞分化に積極的に関与しないことが判明した。しかし同時に骨分化誘導培地にキトサンを添加しても、骨芽細胞分化は阻害されないことも確認できた。よって、キトサンは生体親和性材料としてシート状やゲル状などに成形し、細胞の足場として応用可能であると推測される。

Last year, キトサンモノマーを Peidi にして, mesenchymal stem cell (MSC) のアルカリフォスThe results of the determination of the activity of the fiber and the results of the differentiation of osteoblasts and the influence of the differentiation of osteoblasts and the results of the analysis were clearly understood.そのため, this year's はモノマーよりも molecular weight の大きいオリゴマー, The impact of osteoblast differentiation on osteoblast differentiation using MSC was investigated. DMEM (10% FBS, FGF added) was used to maintain the soil and cultivate the MSC in a 60mm dish. Cellular がコンフフルエントになったで、General なbone differentiation induction therapy (maintenance therapy +10^<-7>Mデキサメタゾン+10mM グリセロリン acid + 50μg/ml アスコルビン acid) ならびにmaintenance にモノマー, オリゴマー, ポリマーをそれぞれadd した平地に replace した. The final concentrations of each group are 0.005%, 0.0005%, and 0.00005%. On the 10th, 15th, and 20th day of culture, bone differentiation induction of MSCs was evaluated by にアリザリンレッド staining and Ca quantitative method. General bone differentiation induction, MSC culture for 10 days, MSC staining, 15th and 20th day MSC staining Intense dyeing of されたが, モノマー, オリゴマー, ポリマーにおいてはOn the 10th, 15th, and 20th day of cultivation, the dyeing process is carried out. Calcium and Ca quantification are not available on the 15th and 20th day of the general osteodifferentiation induction period. The meaning of the difference is the same as the meaning of the difference, and the meaning of the difference is the difference between the meaning and the difference. Previous studies have shown that the effects of bone bud cell proliferation and differentiation on osteoblasts and bone bud cells are good In this study, it was found that MSC bone bud cell differentiation is positive and that it was determined in this study. At the same time, it is necessary to add bone differentiation into the soil, and to confirm that osteoblast differentiation is blocked.よって, キトサンは biocompatible material としてシート-shaped やゲル-shaped materialどに Forming し、Cell の Foot field として応 Use it possible であると guess される.