羊膜を用いて三次元培養皮膚を作り及び臨床応用

利用羊膜制作三维培养皮肤及临床应用

• 批准号: 07F07211
• 负责人: 橋本 公二
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07F07211/
• 关键词: 培養皮膚; 羊膜; 移植; 再生; 角化細胞; 基底膜; 免疫染色; 電顕

本研究の具体的な目的は、羊膜を応用することにより、簡便かつ大量作製可能な三次元培養皮膚作成法を確立することである。簡便な方法を確立することができれば、当然大量作製法につながると予想される。昨年度従来の三次元培養皮膚作製方法を改良し、線維芽細胞を含むコラーゲンゲルの上に羊膜を密着させ、その上に角化細胞を播種し空気曝露にて重層化させる方法で形態的に優れた三次元培養皮膚を作製する方法を開発した。しかし、コラーゲンゲル作製は非常に複雑であり、作製に時間と手間がかかる。そこで、ゲルを用いないで三次元培養皮膚が作製できないかについて検討した。カルチャーインサートに直接線維芽細胞を播種し、羊膜をカバーしその上に角化細胞を播種し同様に空気曝露にて重層化させた。経時的にサンプルを回収し、HE染色、免疫染色、電子顕微鏡にて検索した。HE染色所見ではゲルなし羊膜付き三次元皮膚においても基底細胞は整然と配列し、有棘層の細胞も均一で、形態的に非常に優れた培養皮膚が作製できた。免疫染色にて基底膜構成成分、細胞間接着因子、細胞骨格、分化マーカーなどの発現を比較したところ、基底膜の成分は線状に均一に発現しており、正常皮膚により近い発現様式であった。電子顕微鏡検査ではヘミデスモゾームは発達しており、基底板、稽留繊維も非常にしっかりとしていた。以上の結果より、羊膜を併用することでゲル作製不要の簡易三次元培養皮膚作製法を開発した。

の specific は な purpose, this study amniotic を 応 with す る こ と に よ り, simple か つ large system may な three-d training method of skin created を establish す る こ と で あ る. The simple な method を establishes する に とがで れば れば れば, and of course, the mass production method に ながると ながると is thought of される. Annual 従 yesterday to の three dimensional skin for improved method を し, line d を bud cells contain む コ ラ ー ゲ ン ゲ ル の に amniotic membrane on を indiscrete さ せ, そ の に on keratinocytes を seeding し empty 気 exposure に て heavy stratification さ せ る method で form に optimal れ た を skin for the three dimensional system す る method を open 発 し た. し か し, コ ラ ー ゲ ン ゲ ル cropping は very に complex 雑 で あ り, cropping に time between と hand が か か る. そ こ で, ゲ ル を with い な い で が skin for the three dimensional system で き な い か に つ い て beg し 検 た. カ ル チ ャ ー イ ン サ ー ト に direct line d を bud cells seeding し, amniotic membrane を カ バ ー し そ の に on keratinocytes を seeding し with others に empty 気 exposure に て heavy stratification さ せ た. Time にサ プ プ を を recapitulation を, HE staining, immunostaining, electronic 顕 micromirror にて検, and た. HE staining can see で は ゲ ル な し amniotic pay き three dimensional skin に お い て も basal cell は whole し と match column, with stratum spinosum の cells も で, shape に very uniform に optimal れ た が skin for making で き た. Immune dyeing に て basement membrane composition, cells indirect factor, bone, differentiation マ ー カ ー な ど の 発 を now compare し た と こ ろ, basement membrane の composition は linear に uniform に 発 now し て お り, normal skin に よ り nearly い 発 presently others type で あ っ た. Electronic 顕 micromirror 検 check で は ヘ ミ デ ス モ ゾ ー ム は 発 da し て お り, base plate, missed 繊 d も very に し っ か り と し て い た. The above <s:1> results よ よ and amniotic membrane を were used in combination with する, <s:1> and とでゲ to prepare a simple three-dimensional skin culture method を.

项目成果

Human amnion improves the development of basement membrane and epidermogenesis in a living skin equivalent

人羊膜可改善活体皮肤等效物中基底膜的发育和表皮发生

• 发表时间: 2008
• 作者: Yang L;Shirakata Y;Hashimoto K;et al
• 通讯作者: et al

A randomized double-blind trial of intravenous immunoglobulin for pemphigus

• DOI: 10.1016/j.jaad.2008.09.052
• 发表时间: 2009-04-01
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN ACADEMY OF DERMATOLOGY
• 影响因子: 13.8
• 作者: Amagai, Masayuki;Ikeda, Shigaku;Hashimoto, Koji
• 通讯作者: Hashimoto, Koji

A marked increase in serum soluble Fas ligand in drug-induced hypersensitivity syndrome

药物引起的过敏综合征中血清可溶性 Fas 配体显着增加

• 发表时间: 2008
• 期刊: Br J Dermatol 159
• 作者: Tohyama M;Shirakata Y;Sayama K;Hashimoto K
• 通讯作者: Hashimoto K

PPARgamma is an important transcription factor in lalpha,25-dihydroxyvitamin D3induced involucrin expression

PPARgamma 是 lalpha,25-二羟基维生素 D3 诱导的外皮蛋白表达中的重要转录因子

• 发表时间: 2008
• 期刊: JDermatolSci 50
• 作者: Dai X;Sayama K;Shirakata Y;Tokumaru S;Yang L;Tohyama M;Hirakawa S;Hanakawa Y;Hashimoto K
• 通讯作者: Hashimoto K

PPAR gamma is an important transcription factor in 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3-induced involucrin expression.

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of dermatological science
• 影响因子: 4.6
• 作者: X. Dai;K. Sayama;Y. Shirakata;S. Tokumaru;Lujun Yang;M. Tohyama;S. Hirakawa;Y. Hanakawa;K. Hashimoto