脱塩基部位における核酸塩基認識機構解明と新規アフィニティーラベル化法への応用

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研究課題であるDNA脱塩基部位結合リガンドを用いたアフィニティラベル化法について昨年度までに得られたように,モレキュラービーコン法に効果的に適用できることを示してきた。本年度では,開発したラベル化法の一般的な適用範囲を拡大し,その一般性を実証するために,アプタマーアッセイへと適用した(Chem.Commun., 2009)。具体的には,アデノシン検出をモデル系として選出し,DNAアプタマー/APsite含有DNAプローブの二重鎖を構築し,リガンドを添加し,錯形成させて,リガンド蛍光の消光が確認された。ここに,標的分子であるアデノシン添加とともに,アプタマー/アデノシン錯形成反応が効率的に進行し,これに伴い結合していたリガンドが放出され,その蛍光回復が確認できた。本系は他のヌクレオシドには全く応答せず,高い特異性を示すことが分かった。さらに,自己集合型アプタマーにも適用できることを示し(Chem.Eur.J., 2009),本研究で開発したラベル化法が高い適用性を有しており,核酸アッセイの構築に極めて有効であることが分かった。また,昨年度までに開発してきた高親和性核酸結合リガンドをミスマッチ塩基対に適用することに着目し,遺伝性の神経変性疾患と密接に関連するトリヌクレオチドリピート蛍光検出を達成した。さらに,RNA二重鎖を標的とすることに着目し,遺伝子発現制御因子であるmicroRNA検出法の開発を試みた