活動型植物レトロトランスポゾンの転移誘導による「正の遺伝学」アプローチの確立

通过诱导活性植物逆转录转座子转座建立“正遗传学”方法

• 批准号: 07J11914
• 负责人: 山下 裕樹
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J11914/
• 关键词: レトロトランスポゾン; 遺伝子組換え; GFP発現解析; タバコ; サツマイモ; トランジェントアッセイ

異種植物におけるLIbの転移誘導条件解明本年度はまず、前年度の研究で、トランスポゾンディスプレー法により検出されたLIbの転移を示すバンドの特徴付けを行った。その結果、2コピーの転移後のLIb-Sai3を同定しか。また、転移に伴い形成されるTarget site duplication(TSD)が確認でき、タバコの形質転換の間にLIbが転移したことが証明できた。異種植物において人為的に転移誘導に成功した植物のLINE型レトロトランスポゾンとしては世界初となる。次に、転移の前提条件となる転写の条件を調べるため、LIbのプロモーター配列とGFP遺伝子を融合したキメラ遺伝子断片をタバコに遺伝子組換えした(LIb::GFP導入系統)。その結果、タバコのカルス、茎、根で転写活性を有することが示された。また、RT-PCRにより、葉でも転写活性を有することが明らかとなった。さらに、LIb::GFP導入系統の茎頂培養により、培地に接する茎頂付近の細胞でGFP発現が観察され、茎頂培養はLIbの転写を活性化することが明らかとなった。そこで、LIb導入系統の茎頂培養を行い、LIb導入系続から合計30個体の茎頂培養個体を作出した。その結果、30個体のうち1個体でLIbの転移が検出でき、タバコの茎頂培養によりLIbが転移することが明らかとなった。今後は、茎頂培養の条件を検討し、さらに高頻度にLIbの転移を誘導する条件を調査していく。Ipomoea trifidaにおけるLIbの転移誘導タバコにおいて自律性転移をしたLIb-Sai3がI.tirifidaには存在しないことが示された。よって、LIb-Sai3をI.trifidaに遺伝子組換えし、その転移誘導を行おうと考えているが、再生系の確立には長期の研究が必要であり、I.trifidaにおける研究を停止し、現在はタバコの遺伝子組換えに力を入れている。

The migration induction conditions of LIb in xenogeneic plants were explained in this year's and previous year's studies, and the characteristics of LIb migration were analyzed. The result of the test, 2 ° C and 3 ° C is the same. The Target site duplication(TSD) is identified as a result of the change in the form and quality of the Target site. The heterophyte was induced by artificial migration, and the LINE type of plant was induced by artificial migration. Next, the prerequisites for migration and the conditions for writing are adjusted. LIb::GFP introduction system). The results, stems and roots of the plant are shown below. RT-PCR is the most effective method to detect the presence of DNA. GFP expression was detected in cells near the shoot apex cultured in culture medium, and activation of LIb in shoot apex culture medium was observed in cells cultured in culture medium. A total of 30 individuals were cultured from the shoot apex of LIb introduced system and LIb introduced system. The results were as follows: 30 individuals, 1 individual, LIb, LIb, In the future, the conditions for shoot top culture were investigated, and the conditions for inducing high frequency LIb migration were investigated. Ipomoea trifida is the first to be introduced into the system. I.trifida 3: The establishment of regeneration system, the need for long-term research, and the need to stop research. I.trifida 3: The establishment of regeneration system.

项目成果

サツマイモ活動型レトロトランスポゾンの異種植物への導入と発現解析

甘薯活性反转录转座子导入异源植物及表达分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 山下裕樹;山下 裕樹
• 通讯作者: 山下 裕樹

サツマイモ活動型レトロトランスポゾンの異種植物における転移誘導

甘薯活性逆转录转座子在异源植物中的转座诱导

• 发表时间: 2008
• 作者: 山下裕樹