細胞内動態を制御したアデノウイルスベクターの開発

具有受控细胞内动力学的腺病毒载体的开发

• 批准号: 18890195
• 负责人: 小泉 直也
• 金额: $ 1.68万
• 依托单位: Showa Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890195/
• 关键词: 遺伝子; 薬学; バイオテクノロジー; 再生医療

研究代表者らの過去の検討により、アデノウイルスの受容体であるcoxsackievirus and adenovirusreceptor(CAR)、インテグリン、ヘパラン硫酸との結合性をすべて欠損させたトリプル改変型アデノウイルスベクターは、細胞内へ取り込まれた後の核移行量が著しく低下していることを示唆する結果を見出している。このことから本研究では、アデノウイルスベクターの効率的遺伝子発現に関与する核移行や転写活性に必須の細胞側、ウイルス側の因子を検索・同定することを目的としている。昨年度の検討において、アデノウイルスのヘパラン硫酸との結合能は細胞表面への結合には大きく関与せず、細胞内における細胞内動態において重要な機能を担っていることを明らかとしている。今年度は、これらの結果を下にさらに詳細な検討を進めるため、ファイバーシャフト蛋白質の作製を行っている。ファイバーシャフトのリコンビナント蛋白質を作成することで、シャフト蛋白質単独での機能を評価することが可能であることから、通常の5型アデノウイルスファイバーシャフト、ヘパラン硫酸との結合ドメインであるKKTKモチーフをGAGAに変異させたシャフト、5型よりも短い35型アデノウイルスファイバーシャフトの3種類を作製している。現在、PCRにてファイバーシャフトの遺伝子を増幅し、リコンビナント蛋白質作製のためのプラスミドに挿入した。今後、大腸菌を用いてリコンビナント蛋白質を作製・精製し、細胞内での機能を検討する。また、蛍光標識リコンビナント蛋白質なども作製し、より詳細な検討を行う。本研究はこれらアデノウイルス蛋白質の機能を解明し、さらに遺伝子導入効率に優れた遺伝子導入ベクターの開発につなげることを目的としている。本研究は科学研究費補助金(若手スタートアップ)の助成により推進されてきたが、平成19年度4月下旬より科学研究費補助金(若手研究B)の助成に変更して研究を継続していく。

The research representatives ら ら in the past 検 discussed によ によ, アデノウ ス ス ス ス, である of the recipients であるcoxsackievirus and Adenovirusreceptor (CAR), イ ン テ グ リ ン, ヘ パ ラ ン sulfate と の associativity を す べ て owe loss さ せ た ト リ プ ル change - type ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー は, intracellular へ り 込 ま れ た が の nuclear migration quantity after the し く low し て い る こ と を in stopping す を る results show the し て い る. こ の こ と か ら this study で は, ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー の working rate of the legacy of 伝 son 発 now に masato and す る nuclear migration や planning must write activity に の cell side, ウ イ ル ス side の factor を 検 DE with fixed す る こ と を purpose と し て い る. Yesterday's annual の beg に 検 お い て, ア デ ノ ウ イ ル ス の ヘ パ ラ ン sulfate と の binding energy は cell surface へ の combining に は big き く masato and せ ず, intracellular に お け る intracellular dynamic に お い important な function を bear っ て て い る こ と を Ming ら か と し て い る. Our は, こ れ ら の result を に さ ら に detailed な beg を 検 into め る た め, フ ァ イ バ ー シ ャ フ ト protein の cropping を line っ て い る. フ ァ イ バ ー シ ャ フ ト の リ コ ン ビ ナ ン ト protein を made す る こ と で, シ ャ フ ト protein 単 alone で の function を review 価 す る こ と が may で あ る こ と か ら type, usually の 5 ア デ ノ ウ イ ル ス フ ァ イ バ ー シ ャ フ ト, ヘ パ ラ ン sulfate と の combining ド メ イ ン で あ る KKTK モ チ ー フ を GAGA に - different さ せ た シ ャ フ ト type, 5 よ り も short い type 35 ア デ ノ ウ イ ル ス フ ァ イ バ ー シ ャ フ ト の 3 kinds を cropping し て い る. Now, PCR に て フ ァ イ バ ー シ ャ フ ト の heritage 伝 を raised し picture, リ コ ン ビ ナ ン ト protein cropping の た め の プ ラ ス ミ ド に scions into し た. In the future, escherichia coli を will be used to produce and refine <s:1> proteins を, and the intracellular で <s:1> <s:1> functions を検 will be explored for する. ま た 蛍 light logo リ コ ン ビ ナ ン ト protein な ど も as し, よ り detailed な う beg を 検 line. This study は こ れ ら ア デ ノ ウ イ ル ス protein の function を interpret し, さ ら に posthumous son 伝 import working rate に optimal れ た posthumous son 伝 import ベ ク タ ー の open 発 に つ な げ る こ と を purpose と し て い る. If this study は fee subsidy for scientific research (hand ス タ ー ト ア ッ プ) の furtherance に よ り propulsion さ れ て き た が, pp.47-53 19 year in late April よ り scientific research fee (B) if the hand research grant の furtherance に - more し て research を 継 続 し て い く.