The new approach of peripheral blood stemcell mobilization

外周血干细胞动员的新方法

• 批准号: 19591252
• 负责人: WATANABE Hiroyoshi
• 金额: $ 1.75万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19591252/
• 关键词: 末梢血幹細胞; 破骨細胞; IL-8; MMP-9; CD26; CXCR4

既報に従って、末梢血単核球から破骨細胞を誘導し(Blood 2004 104 : 2484-)、RANKLとM-CSFを添加して培養した. この破骨細胞に、G-CSF(10、100ng/ml)、RANKL(50ng/ml)、G-CSF(10、100ng/ml)+RANKL(50ng/ml)を添加培養し、培養上清を採取した(1、3、5日)。培養上清を用いて各種サイトカインを測定した。測定したサイトカインは、IL-8、MMP-9、cathepsinKである。その結果、破骨細胞はin vitroでIL-8、MMP-9を産生していることが証明出来たが、G-CSFやRANKLの添加による産生の変化(増加)は証明できなかった。cathepsin Kの産生は証明できなかった。末梢血幹細胞動員における破骨細胞の関与が、IL-8やMMP-9、cathepsin Kを介したものである可能性が示唆されているが、G-CSFの破骨細胞に対する直接作用ではなく、その他の細胞など介した作用であると考えられた。また、RANKLによる末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。G-CSFで動員・採取した末梢血幹細胞からCD34陽性細胞分画を分離した。CD34陽性細胞に発現しているCD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。CD34陽性細胞を無血清培地(STEMPRO-34^R)で培養し、培養細胞にG-CSF(100ng/ml)、IL-8(500pg/m1)、G-CSF(100ng/m1)+IL-8(500pg/m1)を添加した。培養細胞に発現している CD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。D26、CXCR1、CXCR2、CXCR4は、CD34陽性細胞分離直後には発現が無かったが、無血清培地のみで発現の増強がみられた。しかし、G-CSFやIL-8の添加による発現の変化は認めず、末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。

Not only Blood 2004 104: 2484 -), but also RANKL M-CSF was added. Osteoclast cells, G-CSF (10, 100ng/ml), RANKL (50ng/ml), G-CSF (10, 100ng/ml) + RANKL (50ng/ml) were added, and the supernatants were collected on the 1st, 3rd and 5th day. The supernatant of the peel is used to measure the quality of the product with all kinds of equipment. Determine the accuracy, IL-8, MMP-9, and cathepsinK levels. The results showed that in vitrogenic IL-8, MMP-9, RANKL, and G-CSF were added to express IL-8 and IL-8 respectively. Cathepsin K