The new approach of peripheral blood stemcell mobilization

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既報に従って、末梢血単核球から破骨細胞を誘導し(Blood 2004 104 : 2484-)、RANKLとM-CSFを添加して培養した. この破骨細胞に、G-CSF(10、100ng/ml)、RANKL(50ng/ml)、G-CSF(10、100ng/ml)+RANKL(50ng/ml)を添加培養し、培養上清を採取した(1、3、5日)。培養上清を用いて各種サイトカインを測定した。測定したサイトカインは、IL-8、MMP-9、cathepsinKである。その結果、破骨細胞はin vitroでIL-8、MMP-9を産生していることが証明出来たが、G-CSFやRANKLの添加による産生の変化(増加)は証明できなかった。cathepsin Kの産生は証明できなかった。末梢血幹細胞動員における破骨細胞の関与が、IL-8やMMP-9、cathepsin Kを介したものである可能性が示唆されているが、G-CSFの破骨細胞に対する直接作用ではなく、その他の細胞など介した作用であると考えられた。また、RANKLによる末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。G-CSFで動員・採取した末梢血幹細胞からCD34陽性細胞分画を分離した。CD34陽性細胞に発現しているCD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。CD34陽性細胞を無血清培地(STEMPRO-34^R)で培養し、培養細胞にG-CSF(100ng/ml)、IL-8(500pg/m1)、G-CSF(100ng/m1)+IL-8(500pg/m1)を添加した。培養細胞に発現している CD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。D26、CXCR1、CXCR2、CXCR4は、CD34陽性細胞分離直後には発現が無かったが、無血清培地のみで発現の増強がみられた。しかし、G-CSFやIL-8の添加による発現の変化は認めず、末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。