Development of inhibition therapy for lymph node metastasis in oral cancer, using super-effective siRNA against CXCR4.

使用超有效的 CXCR4 siRNA 开发口腔癌淋巴结转移抑制疗法。

• 批准号: 19791524
• 负责人: UCHIDA Daisuke
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791524/
• 关键词: 癌; 核酸; トランスレーショナルリサーチ; CXCR4; siRNA; リンパ節転移

本研究は、small interfering RNA (siRNA)を用いたCXCR4の発現抑制により口腔癌のリンパ節転移抑制が可能であるか検討するために以下の実験を行った。すなわち、CXCR4を高発現しており、ヌードマウス同所性移植モデルにてリンパ節転移能を有する口腔扁平上皮癌細胞株B88に対して、CXCR4に対するshRNA発現ベクター導入し、3種類のCXCR4ノックダウン細胞(siCXCR4細胞)を樹立した。その結果、siCXCR4細胞においては、SDF-1誘導性に生じる細胞内カルシウム流入量が著明に減少しており、細胞遊走能も有意に低下していた。この中で、CXCR4の発現レベルが最も低下していたsiCXCR4-17細胞をヌードマウス咬筋内に同所性移植したところ、リンパ節転移のみならず、原発巣のサイズ、マウスの体重減少が有意に抑制された。以上より、CXCR4に対するsikNAがリンパ節転移を抑制する可能性が示唆されたため、siRINAオリゴによるtransfectionの至適条件をluciferase活性を指標に検討した。この条件下に、合成した3種類のCXCR4 siRNAオリゴをCXCR4高発現株であるB88細胞にtransfectionしたが、CXCR4の発現は50%程度しか減弱させることができなかった。この条件下に、リガンドSDF-1を用いたmigration assayを行ったが、CXCR4特異的阻害剤であるAMD3100を用いた実験系と比較して、CXCR4 siRNAによる細胞遊走の抑制効果は50%程度しか得られなかった。そこで、AIMD3100をB88細胞の同所性移植モデルに使用したところ、B88細胞のリンパ節転移は著明に抑制された。以上より、siRNAを用いた実験系では導入効率の改善と配列特異性が極めて重要であり、核酸薬品としてのCXCR4 siRNAの使用は困難であること、CXCR4特異的阻害剤AMD3100はCXCR4を発現している口腔癌のリンパ節転移抑制に有効である可能性が示唆された。

In this study, small interfering RNA (siRNA) was used to inhibit the expression of CXCR4 in oral cancer. Three types of CXCR4 cells (siCXCR4 cells) were established in oral squamous cell carcinoma cell line B88, which has high expression of shRNA and CXCR4 and is capable of cell transplantation. As a result, siCXCR4 cells showed a significant decrease in intracellular influx due to SDF-1 induction, and a significant decrease in cell migration. In this case, the development of CXCR4 cells was the lowest in siCXCR4 -17 cells, and the homologous transplantation in the tendon was intentionally inhibited. The above, CXCR4 related sikNA release inhibition possibility, sirINA release inhibition and optimal conditions for luciferase activity were discussed. Under these conditions, three types of CXCR4 siRNAs were synthesized, and the expression of CXCR4 in B88 cells was reduced by 50%. Under these conditions, SDF-1 migration assay was performed and CXCR4 specific inhibitor AMD3100 was used. In comparison, CXCR4 siRNA inhibited cell migration by 50%. AIMD3100 and B88 cells were used to inhibit the proliferation of B88 cells. These findings suggest that the use of siRNAs is important for improving the efficiency of introduction and alignment specificity, and that the use of nucleic acid agents and CXCR4 siRNAs is difficult, and that AMD3100, a CXCR4-specific inhibitor, has the potential to inhibit migration of oral cancer.

项目成果

CXCR4の発現抑制によるヒトロ腔癌細胞のリンパ節転移と癌悪液質の抑制

抑制CXCR4表达抑制人腔癌细胞淋巴结转移和癌症恶病质

• 发表时间: 2008
• 作者: 内田大亮;尾上富太郎;栗林伸行;大江剛;玉谷哲也;宮本洋二
• 通讯作者: 宮本洋二

Vesnarinone downregulates CXCR4 expression via upregulation of kruppel-like factor 2 in oral squarnous cell carcinoma cells

Vesnarinone 通过上调口腔鳞状细胞癌细胞中 kruppel 样因子 2 下调 CXCR4 表达

• 发表时间: 2008
• 作者: Daisuke Uchida;Yoshifumi Tomizuka;Nasima-Mila Begum;Tomitaro Onoue;Nobuyuki Kuribayashi;Miyabi Tada;Youji Miyamoto
• 通讯作者: Youji Miyamoto

ケモカインレセプターCXCR4のノックダウンによる口腔癌細胞のリンパ節転移抑制

敲低趋化因子受体CXCR4抑制口腔癌细胞淋巴结转移

• 发表时间: 2007
• 作者: 内田大亮;富塚佳史;尾上富太郎;東雅之
• 通讯作者: 東雅之

SDP-1/CXCR4システムを標的とした口腔扁平上皮癌のリンパ節転移抑制の可能性

靶向SDP-1/CXCR4系统抑制口腔鳞癌淋巴结转移的可能性

• 发表时间: 2007
• 作者: 内田大亮;尾上富太郎;富塚佳史;多田雅;栗林伸行;宮本洋二
• 通讯作者: 宮本洋二

Vesnarinone downregulates CXCR4 expression via upregulation of kruppel-like factor2 in oral squamous cell carcinoma cells

Vesnarinone 通过上调口腔鳞状细胞癌细胞中 kruppel 样因子 2 下调 CXCR4 表达

• 发表时间: 2008
• 作者: Daisuke Uchida;Yoshifumi Tomizuka;Nasima-Mila Begum;Tomitaro Onoue;Nobuyuki Kuribayashi;Miyabi Tada;Youji Miyamoto;Daisuke Uchida
• 通讯作者: Daisuke Uchida