Infrarotspektroskopische Untersuchungen am Lambda-Phagen-Cro- Repressor, einem Modellsystem zur Untersuchung von Faltungsvorgängen in Proteinen und von DNA-Protein Wechselwirkungen
对 lambda 噬菌体 Cro 阻遏物的红外光谱研究,这是一个用于研究蛋白质折叠过程和 DNA-蛋白质相互作用的模型系统
基本信息
- 批准号:5362755
- 负责人:
- 金额:--
- 依托单位:
- 依托单位国家:德国
- 项目类别:Research Grants
- 财政年份:1997
- 资助国家:德国
- 起止时间:1996-12-31 至 2002-12-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
Der Cro Repressor aus mit dem Lambda-Phagen infizierten Zellen von Escherichia coli, für den stabile Zwischenzustände während seiner thermischen Entfaltung nachgewiesen wurden, dient als Modellsystem für detaillierte FTIR-spektroskopische Untersuchungen zum Einfluß von Aminosäureaustauschen auf die Konformation und den Faltungsweg von Proteinen. Einen besonderen Schwerpunkt der geplanten Arbeiten bildet die weitere Analyse des Einflusses der unter Gleichgewichtsbedingungen beobachteten Oligomerisierung des Cro Repressors auf die Kinetik der Faltung. Dazu werden schnelle Temperatursprungtechniken in Kombination mit zeitaufgelöster FTIR Spektroskopie eingesetzt. Die vorgesehene ortsgerichtete Isotopenmarkierung ausgewählter Aminosäuren wird es erstmals ermöglichen lokale Konformationsänderungen im Bereich der Polypeptidkette des Cro Repressors während der Entfaltung/Rückfaltung zu verfolgen. Einen weiteren Schwerpunkt bilden vergleichende Untersuchungen zur Konformation des Cro Repressors in freier Form und im Komplex mit Operatorsequenzen unter Einsatz von 13C/15N-markiertem Wildtyp Cro-Protein. Besonderes Augenmerk wird dabei auf die Verfolgung der Kinetik von Konformationsänderungen bei der Komplexbildung gelegt. Die geplanten zeitaufgelösten FTIR-spektroskopischen Untersuchungen in Kombination mit schnellen Mischtechniken (stopped flow) an diesem gut charakterisierten Modellsystem bilden den Prototyp für zukünftige Untersuchungen anderer Bausteine des Transkriptionssystems.
Der Cro Repressor aus dem Lambda-Phagen infizerten Zellen von Escherichia coli, f<s:1> rden stabile Zwischenzustände während seiner thermischen Entfaltung nachgewiesen wurden, dient als Modellsystem f<e:1> r detaillierche Untersuchungen zum Einfluß von Aminosäureaustauschen auf die conformformation und den Faltungsweg von Proteinen。Einen besonderen Schwerpunkt der geplanten arbeen bildet die weitere分析des einflses der under gleichgewictsingingungen bebachteten Oligomerisierung des cross Repressors auf die Kinetik der Faltung。大祖werden schnelle温度喷射技术与zeitaufgelöster FTIR光谱分析技术的结合[j]。Die vorgesehene ortsgerichtete同位素标记物ausgewählter Aminosäuren wid es erstmals ermöglichen lokale Konformationsänderungen im Bereich der Polypeptidkette des Cro Repressors während der Entfaltung/ r<s:1> ckfaltung zu verfolgen。Einsatz von 13C/ 15n - markekiertem野生型Cro- protein。[3]〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕Die geplanten zeitaufgelösten FTIR-spektroskopischen Untersuchungen in combination mit schnellen Mischtechniken(停止流动)和diesem gut charterisierten模型系统bilden den原型系统<e:2> r zuk<e:1> nftige Untersuchungen under Bausteine des transriptionssystems。
项目成果
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