線維芽細胞の血管内皮細胞への分化誘導メカニズムの解明

阐明诱导成纤维细胞分化为血管内皮细胞的机制

• 批准号: 19890145
• 负责人: 大沼 俊名
• 金额: $ 1.9万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19890145/
• 关键词: 線維芽細胞; 分化誘導; 血管内皮細胞; Tie-GFPマウス; 角膜実質

【目的】皮下結合組織には神経細胞、筋細胞、骨細胞、軟骨細胞など様々な細胞に分化する多能性幹細胞が存在する。しかし、線維芽細胞が血管内皮細胞に分化するという報告はこれまでなされていない。線維芽細胞の血管内皮細胞化メカニズムについては明らかにされておらず、その生物学的意義も不明である。そこで本研究では線維芽細胞が血管内皮細胞へと分化する際の誘導物質の検索と、その誘導メカニズムを解析することを目的とした。【方法】Tie2-GFPマウスの角膜を採取し、組織片から角膜実質に存在する線維芽細胞を分離・培養した。これとは別にマウスの腫瘍細胞株であるLLCとsarcoma細胞をDMEM(10%FCS)にて培養し、培養上清を調製した。また、硝酸銀処理により血管新生を誘導したラット角膜を採取した。これをホモジナイズし血管新生組織由来の組織抽出液を調製した。Tie2-GFP線維芽細胞の培養液中にこれらの培養上清や組織抽出液を添加し、GFP発現の変化を蛍光顕微鏡を用いて解析した。【結果】腫瘍細胞株LLC、sarcomaの培養上清(培養時間24h、48h、72h、96h)を添加した場合、いずれの培養上清によっても角膜線維芽細胞におけるGFP発現量に変化は認められなかった。一方、血管新生組織由来の組織抽出液を添加した場合添加後24時間でGFPが発現し、これは72時間後まで継続することが確認された。【考察】培養上清と組織抽出液とでは異なる結果が得られた。どちらも血管新生を誘導する活性があることがわかっており、Tie2-GFP線維芽細胞におけるGFPの発現を誘導すると予想していたが、これに反し、腫瘍細胞株ではGFPの発現を誘導しなかった。腫瘍細胞株は単一の種類の細胞集団からなりVEGFなどの血管新生誘導因子を発現する。しかし今回の結果より、このような単一の細胞種は線維芽細胞を血管内皮には誘導せず、in vivoにおけるheterogeniousな環境要因が関与している可能性が示唆された。

【 Objective 】 Subcutaneous binding tissue に する neurocytes, fascia cells, bone cells, chondrocytes な 々な cells に differentiate する pluripotent stem cells が exist in する. <s:1> う な, linear sprouting cells が vascular endothelial cells に differentiation すると う う report な な れまでなされて れまでなされて な な. The vascular endothionization of endothelial cells in line cells メカニズムに メカニズムに メカニズムに て て て ら is clear ら にされておらず そ and そ <s:1>. The biological significance of である is unknown である. そ こ で this study で は line d bud が endothelial cells へ と differentiation す る interstate の inductive substance の 検 と and そ の induced メ カ ニ ズ ム を parsing す る こ と を purpose と し た. 【 method 】 Tie2 - GFP マ ウ ス の corneal を take し, tissue slice か ら corneal be qualitative に exist す る line d bud cells を isolation, culture し た. こ れ と は don't に マ ウ ス の swollen sores cell lines で あ る LLC と sarcoma cells を DMEM (10% FCS) に て cultivation し, supernatant を modulation し た. Youdaoplaceholder0, silver nitrate treatment によ また angiogenesis を induction <s:1> たラット corneal を treatment た た. The origin of the vascularized neovascularization tissue is that the tissue extract is を prepared and た た. Tie2 - GFP lines d の medium, bud cells に こ れ ら の culture supernatant や tissue extract を add し, GFP 発 の now - the を 蛍 light 顕 micromirror を with い て parsing し た. 【 Result 】 The occurrence of におけるGFP in the tissue cell line LLC and sarcoma fluid culture supernatant (culture time: 24h, 48h, 72h, 96h)を added to the た た and the <s:1> ずれ culture supernatant によって in the corneal line によって changed に and められな められな った った った. Side, angiogenesis origin の tissue extract を add し た occasions add 24 time after で GFP が 発 し, こ れ は after 72 time ま で 継 続 す る こ と が confirm さ れ た. 【 Investigation 】 The results of the culture supernatant と tissue extract とで are different from なる and が obtain られた. ど ち ら も angiogenesis induced す を る active が あ る こ と が わ か っ て お り, Tie2 - GFP line d bud cells に お け る GFP の 発 now を induced す る と to think し て い た が, こ れ に し, swollen sores cell lines で は GFP の 発 now を induced し な か っ た. Abscess cell line らな 単 one type of <s:1> cell group らな らな VEGFな <e:1> angiogenesis inducible factor を occurrence する. し か し today back の results よ り, こ の よ う な 単 one kind of は line d bud の cells を endothelial に は induced せ ず, the in vivo に お け る heterogenious な environment by が masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

組織常在性線維芽細胞は新生血管の内皮に分化する

组织驻留成纤维细胞分化成新血管的内皮

• 发表时间: 2008
• 作者: 藤原 隆;昆 和典;樅木 勝巳;大沼 俊名
• 通讯作者: 大沼 俊名

Role of NF-kB in Constitutive Expression of MAIL in Epidemal Keratinocytes

NF-kB 在表皮角质形成细胞 MAIL 组成型表达中的作用

• 发表时间: 2007
• 期刊: Joumal of Veterinary Medical Science 69
• 作者: Oonuma T;Morimatsu M;Ochiai K;lwanaga T;Hashizume K.
• 通讯作者: Hashizume K.