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ショウジョウバエ遺伝学とケミカルジェネティクスを融合した創薬研究

结合果蝇遗传学和化学遗传学的药物发现研究

基本信息

批准号：
12J10869
负责人：
川口充康
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

当初はショウジョウバエに幼虫にケミカルライブラリーの化合物が入ったエサを食べさせ、スクリーニングを実施する予定であったが、96-well plateを用いて幼虫にエサを食べさせ安定して成虫まで成長させるとことが、想像していたより遥かに難しいことが分かった。エサの組成、水分等検討の余地はあるが、容易ではないと考えた。そこで、ショウジョウバエ研究において汎用されるgene switchの系を用いて、ケミカルスクリーニング系の構築を図った。Gene switchとはRU486のような薬剤を好きなタイミングで処理することで、特定のプロモーター活性を"ON"にするような系である。具体的には、全身で発現誘導をかけられるTubulin genes witchを用いてショウジョウバエTNF-αであるEigerを発現誘導することとした(Tub^<GS> Eiger)。この系統のハエのwing discを解剖して取り出し、96-well plateを用いたdisccultureの系にて培養し、RU486で細胞死を誘導した。すると、RU486処理によりwing discに細胞死が誘導されPl-positiveとなるとともにwing discの崩壊が見られた。Eigerによって誘導される細胞死はJNK依存的、カスパーゼ非依存的な細胞死であると考えられている。従って、JNK阻害剤を用いて誘導された細胞死を抑制しようとしたが、細胞死を止めることが出来なかった。また、カスパーゼ阻害剤zVADを含めて様々な経路の阻害剤、NACなどの還元剤を添加したが同様に細胞死は止まらなかった。以上の検討から、Eigerによって誘導される細胞死を止めるポジティブコントロールとなる有機小分子化合物が見つけられなかった。VivoとvitroでのEigerの細胞死経路が異なるのかもしれない。

When the larvae grow up, they will be fed and stored on a 96-well plate. The composition, moisture, etc. are discussed in detail. The gene switch system is widely used in research and development, and the gene switch system is constructed. Gene switch "ON" for RU486 Specifically, Tubulin genes switch can be used to induce TNF-α in the whole body (Tub^<GS>Eiger). The system was dissected and cultured on a 96-well plate, and RU486 cells were induced to die. RU486 treatment induced cell death in the wing disc. Eiger is the first to induce JNK-dependent cell death, and the second to induce JNK-independent cell death. In addition, JNK inhibitors can be used to inhibit cell death. In addition to the blocking agent, NAC, and the return agent, the blocking agent, NAC, and the return agent are also included in the blocking agent. The above-mentioned organic small molecule compounds can be used to induce cell death. Vivo vitro Eiger's cell death pathway is different.