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ＰＥＮＤＲＥＤ症候群患者由来のｉＰＳ樹立とそのＰＥＮＤＲＩＮ機能解析

PENDRED综合征患者iPS的建立及其PENDDRIN功能分析

基本信息

批准号：
14J05202
负责人：
細谷誠
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

（１）PENDRED症候群特異的iPS細胞の樹立：PENDRED症候群患者３症例から採血を行い疾患特異的iPS細胞を樹立した（２）内耳PENDRIN陽性細胞の誘導法の確立：これまでに内耳PENDRIN陽性細胞の誘導方法は知られていなかった。今回、新規誘導法を樹立し、iPS細胞から内耳前駆細胞マーカー陽性細胞を経て内耳細胞特異的マーカーおよびPENDRED症候群の原因遺伝子であるPENDRINの発現を示す内耳PENDRIN陽性細胞の誘導法を確立した。誘導法の効率化も行いほぼ100％の細胞でPENDRINを発現する高効率誘導法の確立にも成功した。(３）疾患iPS細胞から誘導した内耳PENDRIN陽性細胞と、正常コントロールラインから誘導した内耳PENDRIN陽性細胞の細胞生物学的特性の比較：疾患iPS細胞から誘導した内耳PENDRIN陽性細胞と正常コントロールラインから誘導した内耳PENDRIN陽性細胞の細胞生物学的特性の比較を行い、ストレス脆弱性を疾患iPS細胞から誘導した内耳PENDRIN陽性細胞では示すことを発見した。（４）疾患iPS細胞におけるゲノム編集技術を用いた遺伝子変異修復：疾患iPS細胞に対してTALENを用いてゲノム編集（遺伝子修復）を行い、H723R homo　変異ラインにおいて、１アリルのみ正常化したラインおよび２アリルとも正常化されたラインの樹立に成功した。前述の疾患細胞由来の内耳細胞にのみみられるストレス脆弱性は遺伝子修復により軽減されることを確認した。（５）疾患iPS細胞から誘導した内耳PENDRIN陽性細胞におけるストレス脆弱性をターゲットとした薬剤スクリーニング系の構築とそれを利用した既存薬スクリーニングの実施:疾患細胞由来の内耳細胞にのみみられるストレス脆弱性を評価対象とし、既存薬スクリーニングを行いストレス脆弱性を軽減する薬剤の同定に成功。

(1) Establishment of PENDRED syndrome-specific iPS cells: 3 cases of PENDRED syndrome were collected from patients with PENDRED syndrome.(2) Establishment of induction method of PENDRIN-positive cells in inner ear: The induction method of PENDRIN-positive cells in inner ear was established. Now, new induction methods were established to demonstrate the expression of PENDRIN in inner ear cells, iPS cells, inner ear anterior lobe cells, and PENDRIN positive cells. The establishment of high efficiency induction method was successful when 100% of cells were detected by PENDRIN. (3) Comparison of the cytobiological characteristics of PENDRIN-positive cells in the inner ear between normal and diseased iPS cells: A comparison of cellular biological characteristics of PENDRIN-positive cells in the inner ear induced by iPS cells with those in the normal inner ear. (4) The application of editing techniques in the repair of defective iPS cells: the application of editing techniques in the repair of defective iPS cells, the successful establishment of H723R homo heterogeneities, 1 normalization, 2 normalization, etc. The origin of the cells in the inner ear and the vulnerability of the cells in the inner ear are confirmed. (5) The construction and utilization of iPS cells with disease induced by PENDRIN positive cells in the inner ear: the evaluation of the vulnerability of iPS cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells in the inner ear; the identification of the vulnerability of iPS cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by disease induced by PENDRIN positive cells induced by PENDRIN positive cells induced by disease induced by PENDR