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The role of Ac/N-end rule in the early development

Ac/N端规则在早期发展中的作用

基本信息

批准号：
18J11231
负责人：
竹越大輔
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J11231/
关键词：
N-end rule MAPK経路マウスES細胞未分化因子

项目摘要

マウスES細胞で発現している種々の未分化因子について、Ac/N-end ruleに適合するか否かによってタンパクの安定性が変化するかどうかを、Ac/N-end rule経路の主要アセチル化酵素であるNaa10をノックアウトしたマウスES細胞にてcycloheximide chaseによって検証した。残念ながら、明確に安定性が増すような因子を同定することはできなかった。一方で、Naa10を欠失させたマウスES細胞は、Naive状態からの分化モデルにおいて原始内胚葉への分化が亢進していることを見出した。よって、当初の仮説とは異なり、Naa10は未分化因子の安定性には関与していないが、何らかの他のメカニズムによってNaive状態からの分化に関与していることが示された。そこで、公開されているNaa10ノックアウトマウスES細胞のRNA sequencingデータを用いて、Pathway解析を行い、機能的に亢進している可能性のある経路を割り出したところ、Focal adhesion経路やMAPK経路などが抽出された。FGF4/MAPK経路は原始内胚葉分化に重要な役割を果たすことが明らかにされていることから、同経路の解析をNaa10ノックアウトマウスES細胞において行った。結果、Naa10ノックアウトマウスES細胞では、内在性MAPK経路が亢進しており、そのために原始内胚葉への分化偏向を生じていることが明らかとなった。よって、Naa10は当初の仮説のように未分化因子のバランスへの影響を介してではなく、何らかのメカニズムでFGF4/MAPK経路を修飾することでマウスES細胞の分化に関与することがわかった。

MASES ES cells' undifferentiated factor, Ac/N-end rule するか不かによってタンパクの stability が変化するかどうかを、Ac/N-end Rule経路のmain アセチル化zymeであるNaa10をノックアウトしたマウスES cells にてcycloheximide chaseによって検证した. Cannian ながら, clear and stable が嗗すようなfactor を同定することはできなかった. One party, Naa10, missing, ES cell, Naive state, etc.のdifferentiation モデルにおいてprimitive endoderm へのdifferentiation がしていることを见出した.よって, the original の仮说とはisoなり, Naa10 は undifferentiated factor's stability にはSeki and していないが,何らかのhis のメカニズムによってNaive status からのdifferentiation に关与していることが Show された.そこで、Open されているNaa10ノックアウトマウスES cell RNA sequencingデータを用いて、Pathway analysisを行い、FUNCTIONAL に Hyperactivityしているpossibilityのある経路をcutり出したところ、Focal adhesion経路やMAPPK経路などがdraw outされた. The FGF4/MAPK pathway is important for primitive endoderm differentiation.いることから、同経路のanalytic をNaa10ノックアウトマウスES cell において行った. Result: Naa10 ES cell activation and intrinsic MAPK pathway hyperactivityており、そのためにPrimitive endoderm へのdifferentiation bias を生じていることが明らかとなった.よって、Naa10は initiallyの仮说のようにUndifferentiated factor のバランスへの Impact を开してではなく、何らかのメFGF4/MAPK modified FGF4/MAPK pathway is used to modify the differentiation of ES cells and the differentiation of ES cells.