海産魚における生殖細胞ゲノムへのインテグレートを目指した遺伝子導入法の開発

开发整合到海水鱼类生殖细胞基因组中的基因转移方法

• 批准号: 19658082
• 负责人: 家戸 敬太郎
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658082/
• 关键词: マダイ; 遺伝子導入; マイクロインジェクション; メガヌクレアーゼ; インテグレート; トランスポゾン; トランスポゼース

前年度の研究で,transposase認識配列を付加した発現ベクターをマダイ受精卵に導入することで,transposaseのmRNAの共インジェクションの有無にかかわらず12.4～14.7%の個体の鰭からGFP遺伝子が検出され,共インジェクションした場合には斃死個体から高率でGFP遺伝子が検出された。このようにメダカのtransposase認識配列をマダイが認識して転移する能力が示唆されたが,マダイ由来の転移があることからtransposaseシステムは安定的なトランスジェニック系統作出の技術として問題があることが考えられた。そこで本年度は18塩基の配列を認識可能なmeganucreaseの利用について検討した。骨格筋で強く発現するα-アクチンプロモーターに緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を連結したDNA断片の両端にmeganucrease I-SceIの認識配列を付加したプラスミドベクターを作成した。2009年12月に秋季から冬季にかけて産卵する香港系統のマダイから採卵し,上記発現ベクターおよびI-SceIの共インジェクションを試みたが,卵質が悪く発生しなかった。そこで,急遽マダイ4歳魚を陸上水槽に収容して蛍光灯による長日処理および加温によって成熟を誘導したところ,1月中旬から産卵を開始した。産卵が安定するのを待って,2月11日にマダイ受精卵へのマイクロインジェクションを再度行った。上記の発現ベクター100ng/μlとI-SceIを3U/μlおよび1U/μlの濃度で共インジェクションする試験区と,発現ベクターのみをインジェクションする対照区を設定し,各試験区とも1,000粒以上の卵にマイクロインジェクションした。その結果,3U区で230尾,1U区で315尾,対照区で309尾の孵化仔魚が得られ,3U区のみに骨格筋にGFPを発現する個体が認められた。GFP発現観察後はそれらの仔魚を飼育した。

In the previous year's study, transposase was assigned to register the number of fertilized eggs, and the total number of transposase mRNA was 12.4 and 14.7%. In the previous year's research, the number of people who were fertilized was significantly higher than that of the fertilized eggs. In the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year, in the previous year, in the study of the previous year This is an indication of the ability to transfer information and knowledge of transposase. The reason for this is that the system makes technical and technical problems. The reason is that it is necessary to transfer the information of the transposase. This year's 18-year-old base will be equipped with information that may be used by the meganucrease to make use of the information. The reinforcement of the bone bar shows that the color is different. The DNA fragment is linked to the DNA fragment. The end of the meganucrease I-SceI is attached to the column. In December 2009, the Hong Kong system received a clean slate of eggs during the winter season. In December 2009, the I-SceI of the Hong Kong system was born and the eggs were born. After a long period of time, the capacity of the sink, the light lamp, the temperature, the temperature, the temperature, The egg was tranquilized and the fertilized egg was waiting for him. On February 11, the fertilized egg was restarted. In the previous section, you can see that the 100ng/

项目成果

Pulsed expression of growth hormone mRNA in the pituitary of juvenile Pacific bluefin tuna under aquacultured conditions

水产养殖条件下太平洋蓝鳍金枪鱼幼鱼垂体生长激素 mRNA 的脉冲表达

• 发表时间: 2008
• 期刊: Aquaculture 281
• 作者: Nakamura Y;Horinouchi M;Sano M;Shibuno T;渡邊良朗;渡邊良朗・謝松光;金治佑・渡邊良朗;Watanabe Y;Watanabe Y;渡邊良朗;西田淳子・伊藤幸彦・安田一郎・河村知彦・渡邊良朗;山内梓・志村健・金治佑・河村知彦・渡邊良朗;Watanabe Y;中村洋平・堀之内正博・渋野拓郎・田中義幸・宮島利宏・小池勲夫・黒倉寿・佐野光彦;渡邊良朗・高橋素光;Tatsuo Miyamoto;Kohsuke Adachi;Kohsuke Adachi
• 通讯作者: Kohsuke Adachi

トランスジェニツクマダイの作出技術開発

转基因红鲷生产技术的开发

• 发表时间: 2008
• 作者: Nakamura Y;Horinouchi M;Sano M;Shibuno T;渡邊良朗;渡邊良朗・謝松光;金治佑・渡邊良朗;Watanabe Y;Watanabe Y;渡邊良朗;西田淳子・伊藤幸彦・安田一郎・河村知彦・渡邊良朗;山内梓・志村健・金治佑・河村知彦・渡邊良朗;Watanabe Y;中村洋平・堀之内正博・渋野拓郎・田中義幸・宮島利宏・小池勲夫・黒倉寿・佐野光彦;渡邊良朗・高橋素光;Tatsuo Miyamoto;Kohsuke Adachi;Kohsuke Adachi;Keitaro Kato;家戸敬太郎;家戸敬太郎
• 通讯作者: 家戸敬太郎

Molecular cloning and daily mRNA levels of prolactin and somatolactin in apuacultured Pacific bluefin tuna(Thunnus orientalis)

养殖太平洋蓝鳍金枪鱼催乳素和生长抑素的分子克隆及每日mRNA水平

• 发表时间: 2009
• 期刊: Aquaculture 296
• 作者: Nakamura Y;Horinouchi M;Sano M;Shibuno T;渡邊良朗;渡邊良朗・謝松光;金治佑・渡邊良朗;Watanabe Y;Watanabe Y;渡邊良朗;西田淳子・伊藤幸彦・安田一郎・河村知彦・渡邊良朗;山内梓・志村健・金治佑・河村知彦・渡邊良朗;Watanabe Y;中村洋平・堀之内正博・渋野拓郎・田中義幸・宮島利宏・小池勲夫・黒倉寿・佐野光彦;渡邊良朗・高橋素光;Tatsuo Miyamoto;Kohsuke Adachi
• 通讯作者: Kohsuke Adachi

Construction of an expression vector containing a 〓-actin promoter region for gene transfer by microinjection in red sea bream Pagrusmajor

构建含有〓-肌动蛋白启动子区的表达载体，用于红鲷显微注射基因转移

• 发表时间: 2007
• 期刊: Fisheries Science 73
• 作者: Nakamura Y;Horinouchi M;Sano M;Shibuno T;渡邊良朗;渡邊良朗・謝松光;金治佑・渡邊良朗;Watanabe Y;Watanabe Y;渡邊良朗;西田淳子・伊藤幸彦・安田一郎・河村知彦・渡邊良朗;山内梓・志村健・金治佑・河村知彦・渡邊良朗;Watanabe Y;中村洋平・堀之内正博・渋野拓郎・田中義幸・宮島利宏・小池勲夫・黒倉寿・佐野光彦;渡邊良朗・高橋素光;Tatsuo Miyamoto;Kohsuke Adachi;Kohsuke Adachi;Keitaro Kato
• 通讯作者: Keitaro Kato

マダイにおけるvasa遺伝子のクローニングと発現に関する研究

真鲷vasa基因的克隆及表达研究

• 发表时间: 2007
• 作者: Nakamura Y;Horinouchi M;Sano M;Shibuno T;渡邊良朗;渡邊良朗・謝松光;金治佑・渡邊良朗;Watanabe Y;Watanabe Y;渡邊良朗;西田淳子・伊藤幸彦・安田一郎・河村知彦・渡邊良朗;山内梓・志村健・金治佑・河村知彦・渡邊良朗;Watanabe Y;中村洋平・堀之内正博・渋野拓郎・田中義幸・宮島利宏・小池勲夫・黒倉寿・佐野光彦;渡邊良朗・高橋素光;Tatsuo Miyamoto;Kohsuke Adachi;Kohsuke Adachi;Keitaro Kato;家戸敬太郎;家戸敬太郎;常本 和伸;笹尾 紘平
• 通讯作者: 笹尾 紘平