放線菌A-ファクター依存性遺伝子群の時空間的発現系に関するバイオイメージング

放线菌A因子依赖性基因时空表达系统的生物成像

• 批准号: 24780066
• 负责人: 七宮 英晃
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24780066/
• 关键词: 応用微生物; 細菌; ゲノム; 遺伝子発現; 放線菌; ストレプトマイシン; ABCトランスポーター; StrVW

放線菌S. griseusにおいて、A-ファクター制御カスケードにおける主要な転写活性化因子AdpAは、形態分化・二次代謝関連遺伝子群の制御に必須である。特定の培養時期にてAdpAによって発現活性化されるこれら遺伝子群は、その機能に応じて細胞内の異なる部位にて発現している必要があると思われる。しかし、その詳細は不明である。本年度においては、AdpAの菌糸内における経時的発現分布と局在、およびAdpA依存性の形態分化もしくは二次代謝関連遺伝子群の経時的な発現分布と局在を、蛍光顕微鏡を用いて細胞レベルにて明らかにすることを目的として、共焦点レーザー蛍光顕微鏡を用いた顕微鏡観察の手法開発と各種融合遺伝子の構築、ならびにストレプトマイシン分泌装置、StrV/StrWの機能解析を行った。その結果、顕微鏡観察手法の観察については当初の計画をほぼ達成することができ、構築した解析手法によって、以下のような成果を得た。1)AdpAの構造遺伝子の転写はほぼすべての菌糸にて認められたが、AdpAタンパク質は気中菌糸(胞子鎖)には存在しないことが判明した。2)AdpA依存性遺伝子のうち、adsA遺伝子の転写に由来するレポータータンパク質(mCherry)の蛍光は気中菌糸の「根元」、いわゆるsubapical stem付近と気中菌糸に認められた。形態分化に必須なadsAの転写にこうした菌糸内部位特異性が認められたことは本研究が初めてである。3)ストレプトマイシン分泌装置と予想されていたStrV/StrWについて、これらが実際にストレプトマイシン分泌に寄与していること、ならびに菌糸細胞膜に両者が共局在していることをFRET(Fluorescence resonance energy transfer : 蛍光共鳴エネルギー転移)観察によって示した。本成果は学会にて発表し、かつ、平成25年度中に論文として投稿予定である。

Actinomycetes S. Griseus において, A-ファクターcontrol カスケードにおける is the main activating factor AdpAは, morphological differentiation and secondary metabolism related to the remaining subgroup のcontrol である. The specific culture period of AdpA is now activated and the remaining subgroups are active. The functions of the different parts of the cells are different, and the necessary parts are necessary.しかし、そのDetailsはUnknownである. Current distribution and dependence status of AdpA in the current year's bacteria The current distribution of secondary metabolism-related genetic subgroups in the differentiation of secondary metabolism and the use of microscopic microscopy in cells. Various methods of using the いた鍕microscope observation technique for the purpose of て明らかすることを, confocal レーザー蛍optical micromirror Integrating the construction of the obituary, the secretion device of the ならびにストレプトマイシン, and the functional analysis of StrV/StrW. The result, the microscopic observation technique, and the original plan were achieved.ることができ、Construction したanalytic technique によって、The following のような results are obtained. 1)AdpA's structure remains, The existence of bacteria (spore lock) in the AdpA タンパク substance has been confirmed. 2) AdpA dependency 伝子のうち, adsA 伝子の転WRITE origin するレポータータンパク之(mCherry)の蛍光は気中bacteria 糸の「元元」、いわゆるsubapical The stem is close to the bacteria in the stem. Morphological differentiation is necessary and the site specificity within the bacterial strands is necessary. This study is the beginning of this study. 3) ストレプトマイシン secretion device と月思されていたStrV/StrW について、これらが実间にストレプトマイシFluorescence Resonance energy transfer: 蛍光 resonance エネルギー転shift) 観看によって Show した. This achievement is submitted to the Institute of Science and Technology, and it is scheduled to be submitted for publication in 2009.

项目成果

放線菌Streptomyces griseusにおけるABCトランスポーターStrVWの機能解析

灰色链霉菌ABC转运蛋白StrVW的功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 七宮英晃;毛利佳弘;大西康夫
• 通讯作者: 大西康夫

Streptomyces griseusにおけるストレプトマイシン分泌装置StrVWの機能解析

灰色链霉菌链霉素分泌装置StrVW的功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 七宮英晃;毛利佳弘;大西康夫
• 通讯作者: 大西康夫