線溶因子を介したVitronectinプロセッシング制御と細胞死制御機構の解明

阐明纤溶因子介导的玻连蛋白加工控制和细胞死亡控制机制

• 批准号: 25861143
• 负责人: 羽澤 勝治
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Institute of Radiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25861143/
• 关键词: Vitronectin; PAI-1; プロセッシング; 放射線

Vitronectin (VN)は主に肝臓で産生される。この時、プロテアーゼ（Furin）による切断（プロセッシング）を受け、2種類のフォーム（全長型VN75・切断型VN75/10）が存在する。このVNフォーム形成過程に対する線溶系因子Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI-1)の影響を検討し、以下の結果を得た。ヒト組み換え型たんぱく質を用いた解析から、rVNとrFurinを至適条件下で反応させるとすべてのVNが切断型VN65/10になった。この時、rPAI-1が存在することで、FurinによるVNのプロセッシングは阻害された。また、大腸菌発現系で精製した野生型rPAI-1WT及びVNとの結合性が弱い変異型rPAI-1MTについて検討すると、rPAI-1MTはrPAI-1WTに比べてrVNプロセッシング阻害効果は弱かった。VN及びPAI-1遺伝子をHEK293細胞に共発現させると、VN遺伝子単独発現に比べVNのプロセッシングは強く抑制された。この時、共発現した細胞では全長型VN75が細胞外（培養液中）に放出されていた。さらに、共発現細胞では細胞内及び養液中のVNはPAI-1と複合体を形成していた。放射線被ばくした肝臓由来癌細胞HepG2はPAI-1の上昇、及びVNプロセッシングの抑制が認められた。放射線照射後のHUVECに対する生存支持効果はrVN（全長型VN75・切断型VN75/10）とrFurinで処理した切断型VN75/10を比較すると、rVNは切断型VN65/10よりも強い活性を示した。以上のことから、組織傷害時に誘導されるPAI-1はVNと結合し、FurinによるVNプロセッシングを抑制し、細胞死抑制効果の高い全長型VN75の放出を制御していることが明らかになった。

Vitronectin (VN) is produced in the liver. This time, Furin, Cut-off, and 2 types of VN (full-length VN75 and Cut-off VN75/10) exist. The effects of Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI-1) on the formation of VN were investigated. For example, if you want to change the VN 65/10, you can change the VN65/10 to the VN65/10. When rPAI-1 is present, it is blocked by Furin and VN. In addition, E. coli production was refined, wild type rPAI-1WT and VN showed weak binding, while variant rPAI-1 MT showed weak inhibition compared with wild type rPAI-1WT. VN and PAI-1 gene co-expression in HEK293 cells, VN gene expression in HEK The full-length VN75 was released from the cells in vitro (in culture medium). The VN PAI-1 complex is formed in both intracellular and nutrient solutions. The increase of PAI-1 and the inhibition of VN protein expression in HepG2 cells induced by radiation exposure were identified. The survival support effect of HUVEC after radiation irradiation was compared with that of rVN (full-length type VN75/10) and rFurin (cut-off type VN 75/10), and rVN (cut-off type VN65/10) showed strong activity. PAI-1 was induced by VN, and VN-1 was inhibited by VN-75.

项目成果

線溶因子を介したVitronectinプロセッシング制御と細胞死制御機構の解明」

阐明纤溶因子介导的玻连蛋白加工控制和细胞死亡控制机制”

• 发表时间: 2013
• 作者: Y Yoshimura;M Kikuchi;S Ueno;E Okumura;H Hiraishi;C Hasegawa;G B Remijn;K Shitamichi;T Munesue;T Tsubokawa;H Higashida;Y Minabe;Aya Takahashi;Shuji Kariya;高橋 綾;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;狩谷秀治;平野昭吾;丸山哲郎;丸山哲郎;Tetsuro Maruyama;羽澤 勝治
• 通讯作者: 羽澤 勝治