权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

クライオ電子顕微鏡を用いたダイニン-微小管複合体の構造解析

使用冷冻电子显微镜对动力蛋白-微管复合物进行结构分析

基本信息

批准号：
08J00020
负责人：
小田賢幸
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyoto University (2009)The University of Tokyo (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J00020/
关键词：
ダイニンクライオ電子顕微鏡構造解析鞭毛微小管 ATP Mass Spectrometry

项目摘要

植物プランクトンであるクラミドモナスから鞭毛を回収し、その運動を司るタンパク質である鞭毛ダイニンの構造解析を行っている。鞭毛ダイニンは微小管を構成するタンパク質であるチューブリンと共重合する性質があり、それにより生成されたダイニン-微小管複合体が私の研究の主要な試料である。ダイニンは2MDaある巨大なATPaseであり、我々の研究によりATP依存的な構造変化を起こすことが明らかになっている(Oda et al.2007)。この構造変化をさらに詳細に解析することが本年度の研究テーマである。1.ATPase活性部位のマッピング電子顕微鏡の実験において、ラベルされた部位が本当に想定されているドメインであることを生化学的に検証するため、アジド化されたATPおよびADPを用いてダイニンとヌクレオチドを紫外線により共有結合させた。そのダイニンをトリプシンで分解し、固相化されたストレプトアビジンを用いてビオチン化ペプチドを精製した。TOF-Mass解析により二つのシグナルを得た。このシグナルは再現性があり、ATPおよびADP両方から同様に検出されている。これにより電顕像でラベルされている部位はATPとADPでは同じであると確認できた。現在、ラベル部位の正確な同定をfinger printingによって試みている。2.電子トモグラフィーネガティブステイニング法を用いてストークドメインのATP依存的構造変化を観察している。モリブデンを染色剤に使用し、サンプルをトレハロースアモルファス膜に包埋することにより高いコントラストを得ること成功した。国立神経精神センターの諸根室長との共同研究により、高傾斜かつ多サンプルのトモグラムを撮影した。通常のback-projection法からある程度ストーク像を観察することができた。

The plants do not know how to do the flagellum, the flagella, the flagellum, the flagella, the flagella, the flagellum, the flagellum, the flagella, the flagella, the flagellum, the flagella, the flagellum, the flag The flagellum, the microtubule, the flagellum, the flagellum, the microtubule, the microtubule This is a huge 2MDa. We will study the creation of ATP dependencies. We will understand that Oda et al.2007 is the most important thing. In the course of this year's research, this year's research will be conducted in the first place. The active parts of 1.ATPase are sensitive to microphones, biochemistry, chemistry, biochemistry, ADP, UV, UV. This is due to the decomposition and solidification of the solid phase. The TOF-Mass parses how to get the result of the two steps. Please make sure that you have sex again, and that you can use ATP to make sure that you have the same information. Please make sure that you are in the same position as you are in the ATP ADP room. Now, the correct location is the same as that of the finger printing. two。 The computer system is used to monitor the performance of the ATP-dependent chemical system. The dye was used, the membrane was embedded, the membrane was embedded and the success was obtained. The director of the root office of the national spiritual culture jointly studies the film, the high-level and the high-level schools. Usually, the back-projection method is used to determine the extent of the disease.