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Elucidation of Molecular Sorting Mechanisms using Cryo-electron microscopy

使用冷冻电子显微镜阐明分子分选机制

基本信息

批准号：
21H02654
负责人：
小田賢幸
金额：
$ 11.15万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02654/
关键词：
クライオ電子顕微鏡繊毛ダイニン

项目摘要

緑藻Chlamydomonasを用いて繊毛タンパク質動態およびチューブリンの翻訳後修飾について2つの成果を得た。１．　pHショックによる鞭毛喪失後の鞭毛再構築過程で、鞭毛タンパク質を積極的に合成することを明らかにした。従来、新規合成鞭毛タンパク質の追跡には放射性同位体が用いられていたが、本研究では、抗生物質puromycinを新規合成ペプチドに取り込むことを利用した、非放射性のSUnSET法を開発した。SUnSET法を用いることで、Chlamydomonasにおける鞭毛への新規タンパク質取り込みを可視化する強力なツールが得られた。2. α-チューブリンとβ-チューブリンはC末端にグルタミン酸リッチな非構造領域（CTT）を持ち、その機能はまだ明らかでないが、繊毛の運動に影響を与える翻訳後修飾の部位として働いている。Chlamydomonasは、同一のタンパク質をコードする2つのα-チューブリン遺伝子と2つのβ-チューブリン遺伝子のみを持っている。この単純な遺伝子構造により、野生型チューブリンを変異型に完全に置き換えることが可能になる。本研究で、CRISPR/Cas9を用いて、CTTが修飾されたチューブリンを発現する変異株を作成した。α-チューブリンのCTTの4つのグルタミン酸残基がアラニンに置換された変異株では、ポリグルタミル化チューブリンがほぼ消失し、麻痺した繊毛を示した。対照的に、β-チューブリンのCTTのグルタミン酸リッチ領域を欠いた変異株は、中心装置を欠いた短い繊毛を形成した。この表現型は、β-チューブリンのCTTに依存するカタニンサブユニットの変異株と類似している。この研究により、α-およびβ-チューブリンのCTTが繊毛の形成と機能において異なる重要な役割を果たしていることが明らかになった。

Chlamydomonas is used to modify the quality of the plant. 1. The flagella reconstruction process after flagella loss, flagella regeneration and flagella regeneration after flagella loss In this study, a new method for the synthesis of puromycin was developed. The SUN SET method is used to visualize the quality of the product. 2.α- Chlamydomonas is the same species as Chlamydomonas, and its α-and β-molecules are the same species as Chlamydomonas. This is a pure genetic construct, wild-type genetic construct, and heterotypic construct. In this study, CRISPR/Cas9 was used to modify the expression of the gene. The 4 groups of amino acid residues in α-CFT are replaced by different species, and the 4 groups of amino acid residues are eliminated and paralyzed. In contrast, the short hairs that are missing in the central device of the CTT's cell-phone technology are formed. The phenotype is similar to that of the β-cyclamate and the CTT dependence of the cyclamate. This research is aimed at the formation and function of hair, α-

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Cryo-electron tomography of Birbeck granules

Birbeck 颗粒的冷冻电子断层扫描

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yuh Sasawaki;Hitoshi Inokawa;Yukiko Obata;Suzune Nagao;Kazuhiro Yagita;小田賢幸
通讯作者：
小田賢幸

Neural and behavioral control in Caenorhabditis elegans by a yellow-light?activatable caged compound

黄光激活笼状化合物对秀丽隐杆线虫的神经和行为控制

DOI：
10.1073/pnas.2009634118
发表时间：
2021
期刊：
Proceedings of the National Academy of Sciences
影响因子：
0
作者：
Takahashi Hironori;Kamiya Mako;Kawatani Minoru;Umezawa Keitaro;Ukita Yoshiaki;Niwa Shinsuke;Oda Toshiyuki;Urano Yasuteru
通讯作者：
Urano Yasuteru

Cryo-electron tomography of Birbeck granules.

伯贝克颗粒的冷冻电子断层扫描。