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低温誘導性NTR-Cの機能解明に基づく耐凍性植物の作出

基于冷诱导NTR-C功能的阐明培育抗冻植物

基本信息

批准号：
08J02023
负责人：
町田豪
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は下記に示す(1)～(4)の項目について研究を実施した。(1)CvNTRC/CvPrxのタンパク質レベルでの機能解析両組換えタンパク質を0-500mM NaCl含有緩衝液内で反応させ,ゲルろ過クロマトグラフィーによる複合体検出ならびに分子量測定を行った。その結果,両タンパク質が形成する複合体ピークは塩濃度により異なる保持時間で検出された。また,100mM NaCl存在下で過酸化物分解活性が最大となったことから,本抗酸化系が環境条件により複合体形成様式を変化させ,その活性を調節する機能を持つことが示唆された。(2)CvNTRC,CvPrx遺伝子同時発現酵母の作製とストレス耐性試験CvNTRC,CvPrx遺伝子を単独または共発現する酵母を作製し,耐凍性,耐熱性,酸化ストレス耐性試験を行った。その結果,CvNTRCのみを発現,および両遺伝子を共発現する酵母において,全ストレスに対する耐性が増大した。さらに,酸化ストレス誘導剤であるメナジオン存在下で,両遺伝子の発現による超酸化物アニオンの蓄積抑制が観算された。本成果は,植物NTRCが関与する系の耐凍性,耐熱性への効果とin vivoにおける機能を初めて明らかにしたものである。(3)植物用2遺伝子同時発現ベクターの改変pRI101-ANベクターを用い,CaMV35SプロモーターからNOSターミネーターまでの領域をPCRで増幅し,制限酵素を用いてT-DNA領域に導入することで,2つの異なる遺伝子を個別に同時発現できるベクターに改変した。(4)CvNTRC,CvPrxの植物発現用ベクターの構築と形質転換アグロバクテリウムの作製CvNTRC,CvPrxの単独または両方を前項(3)のベクターに組み込み,植物発現コンストラクトを作製した。本コンストラクトをアグロバクテリウムに導入し,コロニーダイレクトPCRにより導入を確認した。今後,本形質転換アグロバクテリウムを用いてシロイヌナズナの形質転換を行い,本抗酸化系の耐凍性獲得への関与と機能を調べていく。

This year, the following items were recorded: (1)~(4) (1) Functional analysis of CvNTRC/CvPrx complex in 0-500mM NaCl buffer solution and molecular weight determination. As a result, the complex formed by the complex was found to be different in concentration and retention time. In the presence of 100mM NaCl, the decomposition activity of peracidifier was the highest, and the function of this anti-acidification system was maintained according to the environmental conditions, such as the complex formation mode and the activity regulation. (2)CvNTRC,CvPrx genes simultaneously develop yeast production and resistance tests. CvNTRC,CvPrx genes independently develop yeast production and resistance tests to freezing, heat and acidification. As a result, the development of CvNTRC and the co-development of CvNTRC and CvNTRC increased the tolerance of CvNTRC. In addition, in the presence of acidizing agent, the accumulation of hyperacidizing agent was inhibited. The results show that NTRC is related to the freezing resistance and heat resistance of plants. (3)2 genes for plants are simultaneously detected and modified pRI101-AN is used,CaMV35S is used to detect NOS in the field of PCR amplification, restriction enzyme is used in the field of T-DNA introduction, 2 different genes are individually detected and modified simultaneously. (4)CvNTRC,CvPrx plant development use the construction and quality change of the plant development use, CvNTRC,CvPrx plant development use,CvPrx plant development use. This is the first time we've had a chance to get to know each other. In the future, this form and quality conversion technology will be used to implement the form and quality conversion of the anti-acidification system, and the relationship between the acquisition of freeze resistance and the function of the anti-acidification system will be adjusted.