横紋筋の太いフィラメントの長さを決定する新規タンパク質の探索

寻找一种决定横纹肌粗丝长度的新型蛋白质

• 批准号: 08J06514
• 负责人: 花島 章
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J06514/
• 关键词: コネクチン; ミオシン; 太いフィラメント; 筋タンパク質; 横紋筋; 巨大タンパク質; サルコメア; 分子定規

横紋筋の太いフィラメントの長さがどのように決まるのか明確になっていない。巨大弾性タンパク質コネクチンは太いフィラメントの全長に沿って結合しているタンパク質であり、そのAIジャンクション領域は太いフィラメントの端に位置している。そこで、AIジャンクション領域に結合し、太いフィラメント構成タンパク質であるミオシンの重合を止める未知のタンパク質が存在するのではないかと考え、研究を行った。昨年度に引き続き、AIジャンクション領域に結合するタンパク質をヒト心筋のcDNAライブラリーから酵母2-ハイブリッド法により探索し、48個の結合する候補を得て、そのうち32個の塩基配列を決定した。特にその中の1つについて、大腸菌内で融合タンパク質として発現・精製後、AIジャンクション領域の融合タンパク質との結合をプルダウン法により調べたが、結合は見られなかった。引き続き、他の結合候補に関しても、解析する予定である。また、ミオシン1分子の長さを考慮すると、ミオシンの重合を止める未知のタンパク質はコネクチンのD域やC域の最初のスーパーリピートに結合する可能性も考えられる。そこで、これらの領域をコードする配列を4つに分けて、ヒト心筋のcDNAライブラリーから酵母2-ハイブリッドスクリーニングにて結合タンパク質の候補を探索した。その結果、D1+2領域は24個結合候補を得て、そのうちの20個の配列を決定した。同様にD3+4領域は45個の候補を得て現在配列解析中であり、C1領域は18個の結合候補を得て全部の配列決定を終えた。一方、D5+6に結合する候補は見つからなかった。特に、D1+2領域結合候補の5クローンとC1領域結合候補の4クローンの配列はヒトのゲノム上に存在するにも関わらず、データベースに登録されていない、未知のものだった。今後、これらのクローンの解析を中心に、更なる研究を進めていく予定である。

The length of the rib is determined by the length of the rib. The whole length of the material is combined with the whole length of the material, and the end position of the material is combined with the whole length of the material. In the field of AI, the combination of AI, AI and AI constitutes the combination of AI, AI and AI. In the past year, 48 binding candidates were obtained and all 32 binding bases were determined by the cDNA library method of yeast. In particular, in the middle of the process, the fusion protein in Escherichia coli is produced, refined, and the fusion protein in the field of AI is produced. For example, if you are a candidate, you can select the candidate. The length of the molecule is considered, and the coincidence of the molecule is unknown. The quality of the molecule is considered, and the initial separation of the molecule is considered. In addition, the cDNA sequence of the core muscle of the yeast 2-terminal region is also explored. D1+2 field is composed of 24 candidate combinations and 20 candidate combinations. In the same way, D3+4 field has 45 candidates and C1 field has 18 candidates. One side, D5+6 combination Special, D1+2 field combination candidate 5, C1 field combination candidate 4, C1 field combination candidate 5, C1 field combination candidate 4, C1 field combination candidate 5, C1 field combination candidate 5, C1 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6 field combination candidate 6, C1 field combination candidate 6 In the future, the analysis of the problem will be centered and the research will be further developed.

项目成果

Characterization of amphioxus nebulin and its similarity to human nebulin

• DOI: 10.1242/jeb.022681
• 发表时间: 2009-03-01
• 期刊: JOURNAL OF EXPERIMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 2.8
• 作者: Hanashima, Akira;Kubokawa, Kaoru;Kimura, Sumiko
• 通讯作者: Kimura, Sumiko

Isolation of nebulin from rabbit skeletal muscle and its interaction with actin.

• DOI: 10.1155/2010/108495
• 发表时间: 2010
• 期刊: Journal of biomedicine & biotechnology
• 作者: Chitose R;Watanabe A;Asano M;Hanashima A;Sasano K;Bao Y;Maruyama K;Kimura S
• 通讯作者: Kimura S

Sequence of the connectin-like giant proteins in invertebrate muscle.

无脊椎动物肌肉中连接蛋白样巨蛋白的序列。

• 发表时间: 2009
• 作者: Hanashima A;Kimura S
• 通讯作者: Kimura S

刺胞動物イソギンチャクのコネクチン類似タンパタ質

刺胞动物海葵的连接素样蛋白

• 发表时间: 2009
• 作者: 花島章;木村澄子
• 通讯作者: 木村澄子

ゲノムデータベースからのウニコネクチン様蛋白質の同定とそのドメイン構造

基因组数据库中海胆Nectin样蛋白的鉴定及其结构域

• 发表时间: 2009
• 作者: 松浦哲;花島章;木村澄子
• 通讯作者: 木村澄子