ヒメミカヅキモの有性生殖に関わる性フェロモンの情報伝達機構の解析

日本鹿角蛾有性生殖过程中性信息素的信息传递机制分析

• 批准号: 08J09714
• 负责人: 赤塚 さと子
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Japan Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09714/
• 关键词: ミカヅキモ; 性フェロモン; ファシクリン; 受容体; 有性生殖

PR-IPと相互作用する分子として、-型細胞低密度培養時(PR-IPに対する反応性が高まっている状態)で発現量が上昇する4種類の遺伝子(Cp02,Cp03、Cp03-like、Cp38、Cp39)に新たに注目した。これらは、いずれも細胞接着などに関わると考えられているfasciclinドメインをコードしており、今回の解析と並行して進めてきたPR-IP Inducerに対するtwo hybridスクリーニングにおいて、全く別のfasciclin familyに属する+型細胞特異的な分子が見いだされていたことからも、これらがPR-IPの受容に関わることが期待された。これらをpGEX 4T-1ベクターにクローニングし、GSTをタグとして大腸菌内で組換え型遺伝子産物の発現を試みた。しかし、目的のタンパク質が不溶化してしまい、培養条件の変更によっても、可溶化することができず、PR-IPとのプルダウン実験に用いることができないことが判明した。そこで、YEpFLAG-1ベクターにクローニングし直し、酵母でFLAGをタグとした組み換え型タンパク質として産生を行ったところ、全てのクローンにおいて目的タンパク質を得ることに成功した。これらの酵母産組み換え型タンパク質を用いて、バッチ法でPR-IPとの相互作用を解析したところ、どの組み換え型タンパク質とも相互作用は認められなかった。このことから、Cp02、Cp03、Cp03-like、Cp38、Cp39タンパク質については、PR-IPの認識には関わっていないこと可能性が示唆された。しかし、酵母による糖鎖修飾はヒメミカヅキモでの修飾と異なることや、結合実験の条件がこれらの分子の機能を妨げている可能性もあり、今後はシャペロン遺伝子保有大腸菌を用いた融合タンパク質の可溶化や、結合実験条件の至適化を検討する必要がある。

PR - IP と interaction す る molecular と し て, - type cell in low density culture (PR - IP に す seaborne が high ま る anti 応 sex っ て い る) で 発 now rising volume が す る 4 kinds の heritage 伝 child (Cp02 Cp03, Cp03 - like, Cp38, Cp39) に new た に attention し た. こ れ ら は, い ず れ も cells then な ど に masato わ る と exam え ら れ て い る fasciclin ド メ イ ン を コ ー ド し て お り, today back to の analytic と parallel し て in め て き た PR - IP Inducer に す seaborne る two hybrid ス ク リ ー ニ ン グ に お い て, whole く don't の fasciclin Family に genus す る + cell type specific molecular が な see い だ さ れ て い た こ と か ら も, こ れ ら が PR - IP の is let に masato わ る こ と が expect さ れ た. こ れ ら を pGEX 4 t - 1 ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し, GST を タ グ と し て で within the coliform group in type え heritage 伝 zi chan content の 発 を now try み た. し か し, purpose の タ ン パ ク qualitative が don't melt し て し ま の い, cultivating conditions - more に よ っ て も, solubilization す る こ と が で き ず, PR - IP と の プ ル ダ ウ ン be 験 に with い る こ と が で き な い こ と が.at し た. そ こ で, YEpFLAG - 1 ベ ク タ ー に ク ロ ー ニ ン グ し straight し, yeast で FLAG を タ グ と し た group み type in え タ ン パ ク qualitative と し て produce line を っ た と こ ろ, whole て の ク ロ ー ン に お い て purpose タ ン パ ク qualitative を must る こ と に successful し た. こ れ ら の yeast production group み type in え タ ン パ ク qualitative を with い て, バ ッ チ method で PR - IP と の interaction を parsing し た と こ ろ, ど の group み type in え タ ン パ ク qualitative と も interaction は recognize め ら れ な か っ た. こ の こ と か ら, Cp02, Cp03, Cp03 - like, Cp38, Cp39 タ ン パ ク qualitative に つ い て は, PR - IP の に は masato わ っ て い な い こ が と possibility in stopping さ れ た. し か し, yeast に よ る sugar lock modified は ヒ メ ミ カ ヅ キ モ で の modified と different な る こ と や, combined be 験 の conditions が こ れ ら の function of molecular の を hinder げ て い る possibility も あ り, future は シ ャ ペ ロ ン heritage 伝 child retain coliform を with い た fusion タ ン パ ク qualitative の solubilization や, combined be の 験 condition to optimization を beg す 検 る necessary が あ る.

项目成果

ヒメミカヅキモの受容体型タンパク質CpRLP1の特性解析

Himemikazukimo 受体型蛋白 CpRLP1 的表征

• 发表时间: 2009
• 作者: 市川真知子;丸川祐佳;赤塚さと子;関本弘之
• 通讯作者: 関本弘之

Characterization of a novel receptor-like protein kinase relating to the sexual reproduction of a unicellular charophycean alga, Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex

与单细胞轮藻有性繁殖相关的新型受体样蛋白激酶的表征，Closterium peracerosum-strigosum-littorale 复合体

• 发表时间: 2010
• 作者: Hashiba S.;Marukawa Y.;Ichikawa M.;Nishii I.;Akatsuka S.;Tsuchikane Y.;Abe J.;Sekimoto H.
• 通讯作者: Sekimoto H.

Characterization of two receptor-like proteins relating to the sexual reproduction of a unicellular charophycean alga, Closterium peracerosum-strigosum-littorale complex

与单细胞轮藻类藻类新月藻-条纹藻-滨海复合体有性繁殖相关的两种受体样蛋白的表征

• 发表时间: 2008
• 作者: Sekimoto;H.;Akatsuka;S.;Ichikawa;M.;Marukawa;Y.;Takekawa;Y.;Abe;J.;and Tsuchikane;Y
• 通讯作者: Y