ヒメミカヅキモの有性生殖に関わる性フェロモンの情報伝達機構の解析

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PR-IPと相互作用する分子として、-型細胞低密度培養時(PR-IPに対する反応性が高まっている状態)で発現量が上昇する4種類の遺伝子(Cp02,Cp03、Cp03-like、Cp38、Cp39)に新たに注目した。これらは、いずれも細胞接着などに関わると考えられているfasciclinドメインをコードしており、今回の解析と並行して進めてきたPR-IP Inducerに対するtwo hybridスクリーニングにおいて、全く別のfasciclin familyに属する+型細胞特異的な分子が見いだされていたことからも、これらがPR-IPの受容に関わることが期待された。これらをpGEX 4T-1ベクターにクローニングし、GSTをタグとして大腸菌内で組換え型遺伝子産物の発現を試みた。しかし、目的のタンパク質が不溶化してしまい、培養条件の変更によっても、可溶化することができず、PR-IPとのプルダウン実験に用いることができないことが判明した。そこで、YEpFLAG-1ベクターにクローニングし直し、酵母でFLAGをタグとした組み換え型タンパク質として産生を行ったところ、全てのクローンにおいて目的タンパク質を得ることに成功した。これらの酵母産組み換え型タンパク質を用いて、バッチ法でPR-IPとの相互作用を解析したところ、どの組み換え型タンパク質とも相互作用は認められなかった。このことから、Cp02、Cp03、Cp03-like、Cp38、Cp39タンパク質については、PR-IPの認識には関わっていないこと可能性が示唆された。しかし、酵母による糖鎖修飾はヒメミカヅキモでの修飾と異なることや、結合実験の条件がこれらの分子の機能を妨げている可能性もあり、今後はシャペロン遺伝子保有大腸菌を用いた融合タンパク質の可溶化や、結合実験条件の至適化を検討する必要がある。