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スプリットルシフェラーゼ系を用いたプレセニリン1の基質選択性に関わる因子の探索

使用分裂荧光素酶系统搜索与早老素 1 底物选择性相关的因素

基本信息

批准号：
08J11338
负责人：
佐藤千尋
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

γセクレターゼは、AD発症に深く関与するアミロイドβの前駆体APPの膜内配列を切断する酵素であり、アルツハイマー病(AD)の治療標的として注目されている。しかし、γセクレターゼは同時に発生、分化、幹細胞の維持に必須なNotch受容体の切断も担うため、副作用の少ないAD治療薬の開発には、Notchシグナル伝達に影響を与えず、APPの切断を特異的に阻害するγセクレターゼ阻害法の探索が必要である。昨年度申請者は、γセクレターゼの基質特異性を制御する因子のスクリーニングに向けて、まずAPP、Notch各基質とγセクレターゼの蛋白質間相互作用を検出するためのスプリットルシフェラーゼ系を立ち上げた。しかし本系では膜蛋白質間での非特異的な相互作用を起因とする高いノイズが検出され、スクリーニングに十分な検出感度が得られなかった。よって本年度は戦略を修正し、APPの細胞内領域をNotchに置換したキメラ蛋白質を作製し、これとNotchのそれぞれにスプリットルシフェラーゼを融合した。またもう片方のスプリットルシフェラーゼをNotch細胞内領域の核内結合蛋白質Rbpjに融合した。Notchはγセクレターゼによって切断された後、細胞内領域が核内に移動してRbpjと相互作用することが知られている。これによって、APPとNotchの切断をそれぞれ可溶性蛋白質であるNotch細胞内領域とRbpjの相互作用によって評価できる。現在、十分な検出感度を得るために系を改良中。

The membrane of γ-ray, AD's disease and β-progenitor APP was arranged in the membrane of cutting off enzymes and treating diseases (AD). Simultaneous induction, differentiation and maintenance of cell cycle are necessary for Notch acceptors to be cut off to take care of the disease, to reduce the side effects of AD treatment, to detect the impact of Notch, and to cut off the characteristics of APP. It is necessary to explore the method of blocking and blocking. For the year of the year, the environmental control factors such as environmental pollution, APP, and the interaction between proteins of various basic components, such as APP, and Notch, were determined to be sensitive to each other. The cause of the non-specific interaction between membrane proteins in our department is that the temperature is very high, and the sensitivity is very high. This year, there is a slight revision, APP, the intracellular domain, Notch, protein, protein, Notch, protein, protein The fusion protein Rbpj was detected in the intracellular domain and nuclear binding protein of Notch. After the Notch is cut off, the intracellular domain, the nuclear transfer, the Rbpj interaction, and the interaction between the cells and the cells are known. The intracellular domain of the soluble protein Notch, the Rbpj interaction and the APP interaction were cut off by APP and Rbpj. At present, ten percent of the sensitivity is in the process of improvement.