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腸上皮細胞および二枚貝中腸腺細胞へのノロウイルスVLPの結合と細胞応答

诺如病毒VLP与肠上皮细胞和双壳类中肠腺细胞的结合及细胞反应

基本信息

批准号：
20380184
负责人：
松田幹
金额：
$ 12.06万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20380184/
关键词：
ウイルス感染症糖鎖食品環境

项目摘要

昨年度までの研究により、分化して細胞極性を獲得したヒト腸上皮様Caco-2細胞にノロウイルスUeno-7k株のVLPsを反応させると、特定の細胞集団の頂端側に結合し、組織血液型H抗原を発現する細胞との部分的相関が見られた。ノロウイルスは多くの遺伝型が知られており、感染力、感受性との関係に興味がもたれた。今年度は、Ueno-7kとは異なる型のノロウイルス株、485株およびU201株のVLPsを調製し、分化したCaco-2細胞への結合と組織血液型H抗原との局在の有無を、免疫蛍光染色後の共焦点レーザー顕微鏡観察により解析した。しかし、485株とU201株は、いずれもUeno-7k株で観察されたCaco-2細胞への結合のような明確な蛍光シグナルは観察できず、組織血液型H抗原との局在も明確にはできなかった。同じカリシウイルス科のサポウイルスVLPsもCaco-2細胞には結合しないことから、ノロウイルスVLPsのCaco-2細胞への結合は遺伝型によって大きく異なる可能性が示唆された。一方、別の研究からヒト腸上皮様細胞株にロタウイルスVLPsを添加するとサイトカイン産生が上昇する可能性が示唆されたため、ノロウイルスVLPsを用いて予備的な実験を行った結果、培養上清へのサイトカイン分泌が上昇する傾向がみられた。今後、詳細な解析と、VLPsの添加がCaco-2細胞の分化や組織血液型抗原糖鎖の発現に及ぼす影響を解析する必要がある。二枚貝中腸腺上皮組織のノロウイルスVLPs受容体の探索研究に関しては、リガンド・ブロット法によりVLPsと結合するタンパク質のバンドを同定し、そのバンドを切り出して、酵素消化後、質量分析によるタンパク質の同定を試みた。しかし、質量マッピング法では同定にいたらず、受容体候補分子をさらに分画し濃縮する必要である。

In the past year, we have studied cell polarity, differentiation, and expression of VLPs in Caco-2 cells. We have also found some correlations between VLPs and apices of specific cell populations. It's a lot of fun to be able to communicate with each other, to be infectious, to be sensitive, to be interesting. The VLPs of Ueno-7k and U201 were modulated, differentiated, bound to Caco-2 cells, and analyzed by confocal microscopy after immunostaining. Ueno-7k strain was detected in Caco-2 cells, and the binding of Ueno-7k strain to Caco-2 cells was detected in Ueno-7k strain. The possibility of different types of binding between VLPs and Caco-2 cells is demonstrated. The results of this study indicate that the possibility of increasing the production of VLPs in intestinal epithelial cell lines and the tendency of increasing the secretion of VLPs in culture supernatant are likely to increase. In the future, it is necessary to analyze in detail the effect of VLPs on the differentiation of Caco-2 cells and the development of blood-type antigen glycans. The study of VLPs receptor in two shellfish intestinal epithelial tissues was carried out by enzyme digestion, mass analysis and identification of VLPs. It is necessary to divide and concentrate the candidate molecules in the same way.