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難人工増殖性腸管ウイルスに対する食品成分の感染抑制機能性評価系の開発

开发评价食品成分对难以人工繁殖的肠道病毒的感染抑制功能的系统

基本信息

批准号：
19658056
负责人：
松田幹
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658056/
关键词：
食品ウイルス糖鎖衛生

项目摘要

1.細胞表面へのウイルス様粒子(VLPs)の結合と内在化を判定する実験系の確立昨年度までの研究により、3種のヒト腸上皮細胞株の中では、Caco-2細胞がVLPsの表面への結合と内在化を免疫組織化学的および生化学的に判定する実験には最も適していることが明らかになった。今年度は、コンフルェントになった後、異なる期間培養したCaco-2細胞を用いて、VLPsの細胞内への取り込みに伴うと推定されるVP1タンパク質の断片化を詳しく観察した。3日および21日間培養後のCaco-2細胞にVLPsを添加して0-180分間培養し、洗浄した後、細胞を溶解して、抗VP1抗体を用いた免疫プロット法によりVP1を検出した。培養時間に依存して、60kDaのVP1のバンド強度が徐々に上昇し、細胞に結合したVLPsの増加が観察され、さらに、培養時間が長い条件では、60kDaのバンドに加えて、30kDaおよび35kDaのバンドが抗VP1抗体で検出された。細胞表面あるいは細胞内での酵素的断片化を受けていると推定された。この断片化は21日間培養した細胞でより顕著であり、3週間程度継続して培養して分化させたCaco-2細胞におけるVP1の断片化を追跡することは、VLPsの結合と内在化を判定する優れた指標になると考えられた。2.食品成分のVLPsに対する接着抑制機能の定量的分析実験系の評価昨年度までの研究により食品成分によるVLPsの培養腸上皮細胞への結合の抑制作用を判定できる実験系が確立できた。今年度は、ノロウイルスに対する自然抗体が検出されたウシ初乳乳清を用いて、この分析系を評価した。細胞培養用マイクロプレート(24および48穴)で細胞を培養し、上記と同様にノロウイルスVLPsを添加し細胞と反応させた。同時にあらかじめウシ初乳乳清と反応させておいたVLPsを用いて同様に細胞と反応させた。その後、上記のように免疫プロット解析により結合したVLPsを検出した結果、添加した初乳タンパク質量に依存してVLPsの結合が抑制された。

1. The combination of VLPs and internalization assay was used to determine the molecular weight of last year's study, three epithelial cell lines, VLPs and Caco-2 cells, combined with the immunocytochemistry of internalization immunocytochemistry to determine the most accurate biochemical assays. This year, after the election, the Caco-2 cell was cultured for use during this year, and the VLPs cell was incubated with the presumption that the VP1 cell was fragmented to monitor the data. 3. After incubation on the 21st, Caco-2 cell VLPs was added to culture at intervals of 0-180. after washing, cell lysate was dissolved, and anti-VP1 antibody was detected by immunoassay to detect VP1. Time-dependent, 60kDa VLPs-dependent, 60kDa VP1-based, cell-based, VLPs-dependent, time-dependent, 60kDa VP1, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60kDa, 60 kDa, 60 kDa The fragmentation of intracellular trypsin on the cell surface is subject to the presumption that it is not. After 21 days of fragmentation, cell culture was used to determine the degree of differentiation, Caco-2, cell culture, VP1 fragmentation, and VLPs combined with internalization to determine the accuracy of the test. two。 The quantitative analysis of VLPs ingredients followed by inhibition mechanism was used to determine the establishment of food ingredients by combining the inhibition of food components, VLPs culture, epithelial cell culture and inhibition. This year, the natural antibody was used to analyze the colostrum whey. The cell culture uses the cell culture method (24 points 48 points) to add the cell culture (24 points) to the cell culture (48 acupoints) and the previous cell culture to the cell culture VLPs. At the same time, the colostrum whey was tested and VLPs was detected by using the same cell line. After treatment, the immune response was analyzed and the results were obtained by combining the results of VLPs and adding colostrum. The amount of colostrum was dependent on the amount of colostrum, and the inhibition effect was combined with VLPs.