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褐色脂肪細胞のアドレナリン受容体シグナリングの肥満発症と予防における役割

棕色脂肪细胞中肾上腺素能受体信号传导在肥胖发生和预防中的作用

基本信息

批准号：
20590221
负责人：
久場健司
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Nagoya University of Arts and Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

β_3受容体活性化を介するミトコンドリアからのCa^<2+>遊離により滑面小胞体(ER)からのCa^<2+>遊離と細胞膜でのCa^<2+>流入に至る一連の連関機構の更なる解析を行った。1)ミトコンドリアとERの隣接:ローダミンBの蛍光とカメレオンの蛍光を同時測定により、ミトコンドリアとERが交互に隣接して存在することを証明した。2)ミトコンドリアからのCa^<2+>遊離の活性化にUCP1が関与することの証明:a)UCP1のSiRNAを褐色脂肪細胞に負荷し、UCP1のmRNAの翻訳を阻害することにより、β_3受容体活性化によるCa^<2+>応答がほぼ消失することが証明された。b)UCP1ノックアウトマウスの褐色脂肪組織からβ_3応答を記録し、野生型の1/3以下に抑制されていることを証明した。同時に行ったRT-PCRにより、UCP2の発現が少し増加しUCP1の役割を代償していることが解った。c)β_3応答にプロテインキナーゼA(PKA)が関与すること:PKAの阻害剤であるH89はβ_3応答をほぼ完全に抑制することを証明した。d)β_3受容体活性化によるERからのCa^<2+>遊離がβ_3受容体に連関するアデニレートサイクラーゼ(タイプ6)とIP3受容体の連関による可能性を、RT-PCRによりこのタイプ6が存在しないことにより否定した。3)ERからのCa^<2+>遊離による容量性Ca^<2+>流入には、TRPC2又はTRPC6の陽イオン透過チャンネルが関与することを、陽イオン透過チャンネルの阻害剤(2APBとルトネウムレッド)の効果とRT-PCRにより示唆した。

The activation of β_3 receptor is mediated by Ca^<2+> free from ER, Ca ^<2 +> free from ER, Ca ^<2 +> influx into cell membrane, and the analysis of related mechanisms. 1) To prove the existence of an interactive adjacency between the two groups. 2) Proof that UCP1 is involved in the activation of free Ca^<2+> from Mitrondalia:a) It is proved that the siRNA of UCP1 is loaded on brown adipocytes and the translation of UCP1 mRNA is blocked, which means that the Ca^<2+> response to β_3 receptor activation disappears. b)UCP1 was found to be inhibited by less than 1/3 of wild-type brown subcutaneous fat. At the same time, RT-PCR detection and UCP2 detection increased, and UCP1 detection and compensation increased. c)β_3 d) The possibility of β_3 receptor activation, ER, Ca^<2+> free, β_3 receptor linkage, RT-PCR, existence of β_3 receptor linkage, and negative. 3)ER and Ca^<2+> free side capacity Ca^<2 +> inflow, TRPC2 and TRPC6 positive side through the network generation and correlation, positive side through the network generation and inhibition agent (2APB) and the results of RT-PCR.