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超高熱古細菌リボソームストークタンパク質とGTP結合翻訳因子の構造・機能研究

高温古菌核糖体柄蛋白和 GTP 结合翻译因子的结构和功能研究

基本信息

批准号：
20870018
负责人：
伊東孝祐
金额：
$ 2.01万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

リボソームタンパク質の一種である“ストークタンパク質"は、リボソームの駆動中枢であるGTPaseセンターの主要構成成分として存在し、GTP結合翻訳因子のGTPaseセンターへの結合、およびGTP加水分解反応を促進するという重要な役割を果たしている。それゆえ、ストークタンパク質とGTP結合翻訳因子の作用機構を明らかにすることが、GTPaseセンター機能解明の中心命題となっているがその分子機構は未だ明らかになっていない。そこで本研究では、結晶化に有利とされている超好熱古細菌を材料とし、ストークタンパク質・GTP結合翻訳因子複合体のGTP加水分解における連続的立体構造を決定する。そして、生化学的検証作業をまじえながら、GTPaseセンターの動的分子機構を明らかにすることを目的としている。本年度は、ストークタンパク質・GTP結合翻訳因子複合体の結晶化に向けて、ストークタンパク質のどの部分がGTP結合翻訳因子と相互作用するのか、当初の予定通りゲルシフトアッセイにて調べた。GTP結合翻訳因子としては、EF-1α、EF-2の2種類について調べた。その結果、ストークタンパク質のC末端削除体はいずれのGTP結合翻訳因子とも相互作用していなかった。反対に、N末端削除体においてはいずれのGTP結合翻訳因子とも相互作用が認められた。これらのことから、ストークタンパク質はC末端領域においてGTP結合翻訳因子と相互作用しているということ明らかになった。今後は、ストークタンパク質のC末端領域とGTP結合翻訳因子とを混合して結晶化のスクリーニングを行い、結晶が得られたらX線回折データを取得する。

One of the most important components of GTPase is the existence of GTPase binding factor, GTase binding factor and GTase hydrolysis reaction promoter. However, since the mechanism of action of the start-chain molecule and the GTP-binding regulator is clearly defined, the molecular mechanism that is the central proposition for the functional understanding of GTPase is unclear. In this study, the crystallization of super-thermoarchaea is beneficial to the determination of the three-dimensional structure of GTP binding factor complexes. The molecular mechanism of GTP-based molecular biology This year, the crystallization process of GTP-binding transcription factor complex was studied, and the interaction between GTP-binding transcription factor and part of GTP-binding transcription factor complex was studied. GTP binding factor, EF-1α and EF-2 are two types of regulatory factors. As a result, the C-terminal deletion of the protein is not detected by GTP binding factor interaction. The GTP-binding factor and the interaction between them are recognized in the reverse direction and the N-terminal deletion. GTP binding factor interaction in the C-terminal domain In the future, the C-terminal region of the crystal structure and the GTP binding factor will be mixed and crystallized to obtain the X-ray reflection.