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Elucidation of the relationship between protein synthesis system and protein degradation system

阐明蛋白质合成系统与蛋白质降解系统之间的关系

基本信息

批准号：
22K19267
负责人：
伊東孝祐
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

細胞内での異常タンパク質の蓄積は、アルツハイマー病やパーキンソン病など、様々な神経変性疾患を引き起こす。よって、これら疾患の治療法確立のためにも、異常タンパク質の産生と分解の機序解明は重要な研究課題である。この機序解明の一環として、本研究ではタンパク質合成系と分解系の間に直接的協調機構が存在するのかを調査する。本年度は、タンパク質合成系の因子であるペプチジルtRNA加水分解酵素の活性が、タンパク質分解系の因子であるタンパク質Xによってどのような影響を受けるか、in vitroで解析するために、ペプチジルtRNA加水分解酵素の基質であるアセチルアミノアシルtRNAの作製を行った。なお、アセチルアミノアシルtRNAは、アミノアシルtRNAのアミノ酸アミノ基がアセチル化されてアミド結合が形成されたものであり、ペプチジルtRNAと同様にペプチジルtRNA加水分解酵素の基質となることが明らかになっている。アセチルアミノアシルtRNAの作製は、tRNAをin vitro transcription systemで合成し、次いでアミノアシルtRNA合成酵素でtRNAに放射性アミノ酸を付加した後、無水酢酸によりアミノアシルtRNAをアセチル化する方法で行った。その結果、活性測定をするに十分な基質を得ることができた。また、実際に合成した基質を使用して活性測定を行った結果、酵素学的パラメーターであるKcatやKmを決定することもできた。今後はこの活性測定系を利用して、タンパク質Xの存在により、どのようにペプチジルtRNA加水分解酵素の活性が変化するかを詳細に調べる予定である。

The accumulation of abnormal substances in the cells causes the occurrence of various diseases. The establishment of treatment methods for these diseases and the mechanism of their generation and decomposition are important research topics. This study investigates the existence of direct coordination mechanisms between mass synthesis and decomposition systems. This year, the activity of tRNA hydrase, the factor of protein synthesis system, the factor of protein decomposition system, the factor of protein X, the factor of protein decomposition system, the factor of protein decomposition system, the factor of protein X, the factor of protein decomposition system, the factor of protein X, the factor of protein decomposition system, the factor of protein X, the factor of protein X The protein is a protein that can be used in the production of protein, protein, and protein. The method for producing tRNA by adding tRNA synthase to the system is described as follows: tRNA synthesis in the nitro transcription system; tRNA synthesis in the system. The results and activities of the assay were determined by the matrix. The results of the enzyme assay are as follows: In the future, this activity measurement is based on the detailed regulation of the activity of tRNA hydrolytic enzyme by using the presence of protein X.