ボツリヌス毒素を用いたシナプトタグミンの可視化とリサイクリング速度の解析

使用肉毒毒素可视化突触结合蛋白并分析回收率

• 批准号: 20650050
• 负责人: 齋藤 直人
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Doshisha University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20650050/
• 关键词: シナプス; シナプス小胞; 神経科学; 神経細胞; イメージング

神経情報処理を恒常的に維持するためには、シナプス伝達が安定して行われる必要がある。伝達物質受容体はシナプス後部にありさえすれば、伝達物質を受容し多かれ少なかれ応答することが出来る。一方、シナプス小胞は内包する伝達物質を放出してしまったらそれで終わりである。そのままでは速やかにシナプス伝達が止まってしまう為、シナプス小胞はリサイクリングされる。シナプス小胞のリサイクリング機構を明らかにすることは、シナプス伝達の恒常性を考える上でも重要な意味を持つだろう。これまで、シナプス小胞のリサイクリングを解析する道具としてFM dye(両親媒性蛍光色素)やSynapto-pHlourin(VAMP2とpH感受性GFPのFusionタンパク)を用いた研究が行われてきた。しかし主にexocytosisまたはendocytosisに着目した研究であり、endocytosisから再放出までの過程(en-rex過程)を詳細に検討した報告は少ない。本研究の目的はこのen-rex過程を解析する方法論を確立することである。この目的のために、ボツリヌス菌毒素Gのシナプトタグミン結合領域を大腸菌生合成系によって作製した。可溶化を促進するようなタグ配列を付加すると、可溶化はされるがこのタグ配列が邪魔をしてシナプトタグミンに結合できない可能性があった。このためタグを単純屏Hisタグとして作製したが全てが不溶化してしまった。この問題を解決する中で、当該部分配列を可溶化するためには1M程度のアルギニンが有効であることが分かった。シナプトタグミン結合領域に蛍光色素を付加し、神経前末端に取り込まれるかどうか実験を行った結果、シナプス前末端には蛍光は観察されなかった。

It is reasonable for God to maintain and maintain peace and stability in order to make sure that it is necessary. The rear part of the receptacle is full of tolerance, and the rear part of the receptacle is filled with more tolerance and less tolerance. On the other hand, the small cell contains the contents of the cell, and the object is released. Please make sure that you don't know how to do it as soon as possible. you don't have to do anything about it. It is clear to the government that "important" means "important" in the examination of constancy, which means that "important" means "to be important". The props, FM dye (medium photopigments), Synapto-pHlourin (VAMP2pH sensitivity GFP, Fusion pigments, etc.) were used to study the behavior of the props. The main reason is that exocytosis

项目成果

Involvement of Ca2+ Channel Synprint Site in Synaptic Vesicle Endocytosis

• DOI: 10.1523/jneurosci.3214-09.2010
• 发表时间: 2010-01
• 期刊: The Journal of Neuroscience
• 作者: Hiroyasu Watanabe;Takayuki Yamashita;N. Saitoh;Shigeki Kiyonaka;A. Iwamatsu;K. Campbell;Y. Mori;Tomoyuki Takahashi

Developmental shift to a mechanism of synaptic vesicle endocytosis requiring nanodomain Ca2+.

• DOI: 10.1038/nn.2576
• 发表时间: 2010-07
• 期刊: NATURE NEUROSCIENCE
• 影响因子: 25
• 作者: Yamashita, Takayuki;Eguchi, Kohgaku;Saitoh, Naoto;von Gersdorff, Henrique;Takahashi, Tomoyuki
• 通讯作者: Takahashi, Tomoyuki

Involvement of AMPA receptor desensitization in short-term synaptic depression at the calyx of Held in developing rats

• DOI: 10.1113/jphysiol.2007.142547
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF PHYSIOLOGY-LONDON
• 影响因子: 5.5
• 作者: Koike-Tani, Maki;Kanda, Takeshi;Takahashi, Tomoyuki
• 通讯作者: Takahashi, Tomoyuki

Developmental changes in calcium/calmodulin-dependent inactivation of calcium currents at the rat calyx of Held

• DOI: 10.1113/jphysiol.2007.142521
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF PHYSIOLOGY-LONDON
• 影响因子: 5.5
• 作者: Nakamura, Takeshi;Yamashita, Takayuki;Takahashi, Tomoyuki
• 通讯作者: Takahashi, Tomoyuki