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トランスポゾン由来進化的高度保存配列の転写調節機能獲得の進化メカニズムの解明

阐明通过转座子衍生的高度保守的进化保守序列获得转录调节功能的进化机制

基本信息

批准号：
20657003
负责人：
隅山健太
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き、トランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析を行うための新しいトランスジェニックマウス作成法の技術改良を行った。一般に普及している従来のトランスジェニックマウス作成法(前核微量注入法)の問題点として、効率が低いこと、ゲノムへの挿入がコンカテマーの挿入となりマルチコピーになることで組換えなどの問題が起きることがあった。ネガティブ制御配列(インシュレーターやエンハンサーブロッカーなど)になっているトランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析を行う場合、プロモーターとの相対的な位置関係は重要な要素で、コンカテマーで挿入された場合ではその機能解析が困難である。こうした問題点を克服するため、DNA型トランスポゾンであるTol2システムを用いたトランスジェニックマウス作成方法を確立した。この方法はTol2配列で挟まれたDNAとTol2トランスポゼースmRNAをマウス受精卵の細胞質に共注入するもので、注入後の受精卵の生存率が高く、さらにゲノムへの挿入効率も非常に高いことから、トータルでの効率が従来の10倍程度高くなった。さらに、挿入は核座位につき一コピーであり、コンカデマーの問題も解消された。また導入されたレポーター遺伝子は不活性化されることなく発現することを確認した。以上の結果からこの新しいトランスジェニックマウス作成法はトランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析はもとより、一般的に応用可能なブレークスルー技術であることが示された。以上の成果はGenomics誌およびBMC Genomics誌に発表された。

The function analysis of the previous year's introduction and development of the new technology Generally speaking, the problem of the method of making it (pre-core micro-injection method) is that the efficiency is low, and the problem of making it into the system is that it is difficult to make it into the system. In the case of functional analysis of the origin of the control field, the positional relationship between the control field and the control field is difficult in the case of important factors. To overcome this problem, we need to establish a method for creating DNA types. The method has high survival rate of fertilized eggs after co-injection of DNA and Tol 2 gene into the cytoplasm of fertilized eggs, and the survival rate of fertilized eggs after injection is very high.さらに、挿入は核座位につき一コピーであり、コンカデマーの问题も解消された。This is the first time I've seen this. The above results show that the method of making the new product is the functional analysis of the origin of the product and the general application of the product. The above results are published in Genomics and BMC Genomics.