トランスポゾン由来進化的高度保存配列の転写調節機能獲得の進化メカニズムの解明

阐明通过转座子衍生的高度保守的进化保守序列获得转录调节功能的进化机制

基本信息

批准号：
20657003
负责人：
隅山健太
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に引き続き、トランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析を行うための新しいトランスジェニックマウス作成法の技術改良を行った。一般に普及している従来のトランスジェニックマウス作成法(前核微量注入法)の問題点として、効率が低いこと、ゲノムへの挿入がコンカテマーの挿入となりマルチコピーになることで組換えなどの問題が起きることがあった。ネガティブ制御配列(インシュレーターやエンハンサーブロッカーなど)になっているトランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析を行う場合、プロモーターとの相対的な位置関係は重要な要素で、コンカテマーで挿入された場合ではその機能解析が困難である。こうした問題点を克服するため、DNA型トランスポゾンであるTol2システムを用いたトランスジェニックマウス作成方法を確立した。この方法はTol2配列で挟まれたDNAとTol2トランスポゼースmRNAをマウス受精卵の細胞質に共注入するもので、注入後の受精卵の生存率が高く、さらにゲノムへの挿入効率も非常に高いことから、トータルでの効率が従来の10倍程度高くなった。さらに、挿入は核座位につき一コピーであり、コンカデマーの問題も解消された。また導入されたレポーター遺伝子は不活性化されることなく発現することを確認した。以上の結果からこの新しいトランスジェニックマウス作成法はトランスポゾン由来の転写調節領域の機能解析はもとより、一般的に応用可能なブレークスルー技術であることが示された。以上の成果はGenomics誌およびBMC Genomics誌に発表された。

从上一年开始，我们对创建转基因小鼠的新方法的技术进行了改进，以对转座子衍生的转录调节区域进行功能分析。传统方法创建转基因小鼠的一个常见问题（原核显微注射）是，它是低效率，并且插入基因组会导致conf插入多个副本中，从而导致重新组合等问题。当对源自转座的转录调节区域的功能分析是负调控序列（例如绝缘体和增强子阻滞剂）时，与启动子的相对位置关系是一个重要因素，并且在与辅助器插入时，很难进行功能分析。为了克服这些问题，建立了使用TOL2系统创建转基因小鼠的方法，即DNA型转座子。该方法涉及将夹在TOL2序列和TOL2转座酶mRNA之间的DNA共同注射到受精小鼠卵的细胞质中，注射后受精卵的施肥卵的存活率很高，并且对基因组的插入效率也很高，导致总效率高约10倍。此外，插入是每个核基因座的一个副本，这也消除了con依的问题。也证实了引入的记者基因在没有被灭活的情况下表达。以上结果表明，这种创建转基因小鼠的新方法是一种突破性技术，不仅可以应用于源自转座子的转录调节区域的功能分析。这些结果已发表在基因组学和BMC基因组学杂志上。